[发明专利]结核杆菌脂阿拉伯甘露聚糖纯化方法及结核杆菌诊断试剂

权利要求书

1.一种结核杆菌脂阿拉伯甘露聚糖（LAM）纯化方法，是采用现有的亲和纯化的方法，其基本步骤包括：装柱、上样、洗涤、解离、电泳分离及分析；其特征在于采用凝集素作为亲和纯化试剂。

2.根据权利要求1所述的结核杆菌脂阿拉伯甘露聚糖纯化方法，其特征在于所述凝集素为刀豆凝集素或刀豆素A、扁豆凝集素、豌豆凝集素、双花扁豆凝集素、槐凝集素、花生凝集素、麦胚素或大豆凝集素。

3.根据权利要求1所述的结核杆菌脂阿拉伯甘露聚糖纯化方法，其特征在于所述凝集素是指能与甘露糖、葡萄糖特异结合的凝集素，包括：刀豆凝集素或刀豆素A、扁小扁豆凝集素或豌豆凝集素。

4.一种由权利要求1、2或3所述方法纯化得到的结核杆菌脂阿拉伯甘露聚糖抗原，其浓度为90 %以上。

5.一种如权利要求4所述LAM抗原在制备LAM抗体检测用试剂中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于所述试剂的基本组成包括：封闭液、洗涤液、金溶胶标记物、渗滤反应板；其中：

渗滤反应板中使用90%以上纯度的LAM抗原包被，LAM抗原用量根据金溶胶标记物浓度调整，浓度包被为0.01-2mg/mL； 

封闭液、洗涤液中含磷酸或TRIS缓冲液，其PH 值范围为6.5-8.5； 

封闭液、洗涤液中含有适量的表面活性剂吐温-20，吐温-20重量含量为0.01-0.1%；

封闭液、洗涤液中还含有聚乙二醇，聚乙二醇分子量在2000-40000之间，聚乙二醇用量按重量计为0.1-2%。

7.一种如权利要求4所述LAM抗原在制备尿液LAM抗原富集、LAM抗体纯化及尿液LAM抗原检测用试剂中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于所述试剂的基本组成包括：LCA富集柱或LCA富集管，及夹心法免疫检测试剂盒，这里，LCA为扁豆凝集素；其中： 

LCA富集柱或LCA富集管用于样本的前处理，对尿液中含有的LAM 进行富集或浓缩； 

LCA富集柱中Sepharose 4B上交联的LCA量不低于1mg/mL；LCA富集管中使用的免疫磁颗粒含LCA量不低于0.01mg/mg；

夹心法免疫检测试剂盒由酶标记抗体、反应底物、洗涤液及微量测定反应板组成；

夹心法免疫检测试剂盒使用的抗体包括：酶标记抗体、微量测定反应板包被的抗体，通过亲和层析纯化获得，即利用亲和层析纯化抗体，经过亲和层析获得的抗体对LAM抗原具有较高的特异性和亲和力，能达到LAM夹心法免疫试剂检测的灵敏度；其中，亲和层析纯化用的亲和层析柱由权利要求4所述的高纯度LAM偶联到固相载体获得。