[发明专利]一种无核性状柑桔品种的培养方法

说明书

【技术领域】

本发明涉及一种无核性状柑桔品种的培养方法，尤其是无核性状对于柑桔的鲜食和加工均是不可缺少的优良性状。因此，柑桔无核品种的培育具有十分重要的经济价值，也是柑桔品种改良的主要目标之一。

【背景技术】

长期以来，国内外采用芽变和实生选种、诱变育种、杂交育种等传统育种方法，虽然获得了无核或少核的柑桔品种或类型，但由于其选育方法具有偶然性和盲目性，目前仅“中柑7号”甜橙和“Star Ruby”葡萄柚等个别品种实现了商业化生产。因此，传统的柑桔无核育种方法存在育种周期长，育种效率低，商业化生产程度差等问题。在用生物技术进行柑桔无核育种研究中，许多学者试图通过胚乳培养、三倍体小粒种子培育、二倍体与四倍体杂交和体-配原生质体融合等技术的应用，以获得无核性状，但迄今未见其无核性状表现方面的报道。

【发明内容】

本发明要解决的技术问题是提供一种无核性状柑桔品种的培养方法，它由于柑桔存在着遗传上高度杂合、珠心胚干扰以及童期长等问题，使杂交育种为主的传统育种方法在柑桔无核品种的培育中面临诸多的困难。迄今育成或获得的无核柑桔品种或种质，绝大多数(包括脐橙、温州蜜柑等著名柑桔优良无核品种)都是通过自然变异的筛选获得的。

为解决上述技术问题，本发明所采用技术方案是：植物基因工程的兴起和发展，为在较短的时期内定向改良作物的性状提供了一条新的有效途径。在用基因工程创造植物雄性不育性状方面，通过导入绒毡层特异性表达启动子调控的致死基因(barnase)，从而获得了雄性不育性状，已在烟草和油菜等作物中取得成功并应用于杂交制种

与现有技术相比，本发明的有益效果是：对于柑桔这类种间甚至属间均可杂交并结籽，同时存在种子多胚性(即珠心组织可发育成珠心胚)的物种，仅靠雄性不育是难于获得达到生产要求的无核性状。

【具体实施方式】

主要技术内容：

1)携带Pwm403-barnase、Pwm403-ipt、P2A12-barnase或P2A12-ipt的重组质粒、表达载体及农杆菌菌株的构建；

2)柑桔离体遗传转化系统的优化；

3)Pwm403-barnase、Pwm403-ipt、P2A12-barnase及P2A12-ipt单基因或双基因转基因柑桔植株的获得与鉴定。

技术关键：

1)重组基因、表达载体及农杆菌菌株的构建；

2)柑桔双基因离体遗传转化系统所需最佳载体、受体及转化及再生条件。

特色：

1)通过基因工程手段，获得雌性败育的转基因植物植株，从而创造植物的无核性状，在国内外尚属新的研究领域；

2)将组织或器官专一性表达的启动子用于外源目的基因在转基因植株中的定位表达，在柑桔中尚属首次。