[发明专利]黄芪皂苷Ⅳ在制备抗肝癌药物中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及中药有效成分提取及应用技术领域。具体涉及黄芪皂苷Ⅳ在制备抗肝癌药物中的应用。

背景技术

正常机体中细胞凋亡和细胞增殖总是在严密调控下维持动态平衡，该平衡一旦被打破，将导致许多疾病的发生，由于细胞凋亡功能下降，突变细胞不能被有效地清除，不断堆积形成肿瘤。能诱导凋亡的药物在肿瘤治疗中发挥重要的作用。

多药耐药(Mtltidrug Resistance，MDR)是肿瘤细胞由一种药物诱发后，同时对多种结构和功能不同的化疗药物产生交叉耐药的相象。肿瘤MDR的机制异常复杂，是多基因、多步骤综合作用的结果。除了主要与多药耐药基因及其编码产物P-糖蛋白(P-glyco-protein，P-gp)所介导的经典机制外，还与凋亡相关基因(如Bcl-2，Ras，P53)等介导的非经典机制密切相关。多药耐药性目前已经成为临床肿瘤化疗失败的主要原因，如何解决这一问题是目前抗肿瘤研究的热点，其中寻找多药耐药性逆转剂或化疗增敏剂(chemosensitizer，CS)是解决MDR问题的有效手段之一。

黄芪是常用的补益类中药，具有补气升阳，益卫固表等功效，临床常用剂型有黄芪注射液，黄芪粗制剂或以黄芪为主的复方。李伟等报道黄芪注射液具有抗心肌缺血及心肌保护作用(黄芪皂苷注射液对心得安诱发心衰犬心脏舒缩功能的影响，中国实验方剂学杂志，2009年12期81-83页)，另外报道称其还对对肾脏、肺有保护作用及抗贫血作用。近年来发现黄芪注射液和参附注射液联合使用亦有减少化疗药物毒副作用的发生，提高机体免疫功能，提高患者生存质量的作用(参附注射液联合黄芪注射液对恶性肿瘤化疗毒副作用的影响，山东医药，2009年第8期，89-90页)，刘成军等报道了黄芪注射液对人鼻咽癌CNE2荷瘤裸鼠移植瘤具有抑制作用，其机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡，降低肿瘤组织中p53和Bcl-2蛋白的表达有关(黄芪注射液对人鼻咽癌CNE2荷瘤裸鼠移植瘤具有抑制作用，中草药，2010年第6期，968-970页)。另外，谢少茹等报道了黄芪多糖对胃癌细胞的抑制作用及其机制(河北中医，2009年第9期，第137-144页)。我们在前期研究中发现黄芪总苷对小鼠肝癌(HepA)与肉瘤(S180)具有抑瘤作用，并且体外抑制肝癌Hela细胞的生长。

以上报道多数采用联合治疗的方式，即使单独使用黄芪注射液、黄芪多糖或黄芪总皂苷进行研究，也因为其成分复杂(黄芪注射液含有多糖类、皂苷类、黄酮类和氨基酸类等成分)、量效关系不明确等原因，均未指出是何种具体成分发挥了上述治疗作用。关于其中单体的作用，尤其是黄芪皂苷类单体的抗肿瘤作用研究仍未见任何报道。关于黄芪皂苷Ⅳ，没有报道公布其具有上述作用，也未见将其制成抗肿瘤制剂的报道。

另外，黄芪多糖、黄芪总皂苷或者黄芪注射液也由于成分复杂，导致难以对其质量和稳定性进行控制，使其满足现代用药要求。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于克服现有技术不足，提供结构组分确证、量效关系确切的抗肝癌药物，尤其是用于提供逆转多药耐药而发挥抗肿瘤作用的药物。

为此，本发明提供如下技术解决方案。

黄芪皂苷Ⅳ在制备抗肿瘤药物中的应用。黄芪皂苷(Astragaloside，AS)Ⅳ的结构如下：

所述肿瘤为肝癌。肝癌是我国高发的恶性肿瘤，据统计，每年约有13万人死于肝癌，占全世界肝癌年死亡人数的43.7％。化疗在预防术后肿瘤复发和转移中发挥着不可替代的作用，但由于多药耐药的存在，使得化疗效果降低或无效，严重影响了病人的预后和生活质量。

所述黄芪皂苷Ⅳ通过逆转肿瘤细胞的多药耐药性发挥抗肿瘤作用。

所述黄芪皂苷Ⅳ与其他药物同时给药或序贯给药发挥抗肿瘤作用。

本发明的有益效果：

1.本发明提供了量效关系明确、结构组分确证的抗肿瘤药物，为临床抗肿瘤新药的开发奠定了基础；

2.本发明提供了逆转多药耐药发挥抗肿瘤作用的药物，为解决化疗药物多药耐药现象提供了新方案。

附图说明

图1黄芪皂苷薄层色谱图(Ⅰ～Ⅵ为分离组分)

图2黄芪皂苷HPLC图(A.混标溶液；B.组分Ⅲ；C.组分Ⅰ；1.黄芪皂苷Ⅳ；2.黄芪皂苷Ⅱ)

图3流式细胞仪检测黄芪皂苷Ⅱ，黄芪皂苷Ⅳ对BEL-7402和BEL-7402/5-FU细胞凋亡的影响

图4流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化(^**P＜0.01VS BEL-7402，n＝3)