[发明专利]多糖结合疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及疫苗领域，更具体而言，本发明涉及多糖结合疫苗及其制备方法。

背景技术

细菌的荚膜多糖是一种重要的保护性抗原。用化学方法纯化的细菌荚膜多糖组分疫苗来预防传染病，是疫苗发展史上的重要举措之一，其中已在全世界范围内广泛应用的多糖疫苗有流行性脑膜炎球菌的A、C、Y和W135等4价多糖疫苗，以及肺炎双球菌23价多糖疫苗。但多糖疫苗存在很大的局限性，在2岁以下婴幼儿中的免疫原性差，不能诱导有效地免疫保护。用细菌的多糖(PS)与蛋白载体通过化学方法制备的疫苗，称之为结合疫苗(conjugate vaccine)。Goebel和Avery早于1929年就首次成功地用化学方法将肺炎球菌的第3型荚膜多糖共价结合至蛋白载体上去制备成多糖-蛋白结合疫苗。这种具有胸腺依赖性(T-dependent，TD)的蛋白载体可将胸腺非依赖性(T-independent，TI)的多糖抗原转变成胸腺依赖性的抗原，从而启动T辅助淋巴细胞产生一系列的免疫增强效应。

自第一个多糖结合疫苗-b型嗜血流感杆菌结合疫苗(Hib)于1987年经美国食品和药物管理署(FDA)批准投入临床应用以来，各种多糖蛋白结合疫苗的研究发展迅速，已成为当今疫苗研究领域的热点之一。目前的结合疫苗主要有流感嗜血杆菌结合疫苗、肺炎球菌结合疫苗、脑膜炎球菌结合疫苗、痢疾杆菌结合疫苗、伤寒Vi结合疫苗、乙型溶血性链球菌结合疫苗等。

大多数的多糖结合疫苗主要以破伤风类毒素(TT)和白喉内毒素的脱毒突变体(CRM197)作为载体，种类比较单一，会造成多糖抗体应答低下的现象，这是由于结合疫苗中相同的载体蛋白只能与同一辅助性T细胞(Th)竞争性结合，从而使每种多糖抗原最终激活的B细胞数量减少，多糖特异性的抗体水平下降。载体的多样化可以使上述问题得到改善，其原因可能是用不同载体蛋白结合同一种多糖时激活的Th细胞克隆数要多于单一载体蛋白的Th细胞克隆数，可产生更高水平的特异性抗体。同时，结合疫苗可同时产生针对多糖和蛋白载体的免疫应答，为多联疫苗的开发提供了思路。结合疫苗还具有载体蛋白效应，在接种结合疫苗时，载体蛋白能产生类似佐剂的作用。因此，对载体蛋白的研究和开发势在必行。

许多研究者致力于开发粘膜投递型疫苗，这种投递途径与大多数病原体的自然感染途径相同，而且粘膜投递途径简单、安全，避免了注射疫苗所需的严格标准，有利于开展大规模人群的免疫接种。许多研究表明，相对于在自然感染中通过粘膜途径感染的一些病原体而言，通过粘膜途径对机体进行疫苗免疫，机体所产生的免疫保护是最有效的。它既能产生机体粘膜系统的局部免疫保护反应，又能产生全身性的免疫反应来预防疾病的发生。因此，开发粘膜投递型疫苗具有一定的科学性和必要性。

有研究表明，以TT为载体蛋白的C群脑膜炎球菌多糖蛋白结合疫苗通过滴鼻免疫小鼠，诱发了较好的粘膜免疫应答。有的研究者将不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)来源的寡糖类物质与TT结合后，滴鼻免疫小鼠，结果产生了较好的体液免疫和细胞免疫应答。因此，TT可以作为粘膜投递型多糖蛋白结合疫苗的蛋白载体。

大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)为代表的一些病原菌蛋白成分是近年来研究较多的一类粘膜佐剂。研究表明，流感病毒亚单位抗原或白喉类毒素(DT)与LTB形成疫苗，共同鼻内免疫小鼠后，血清中产生了高滴度的特异性IgG抗体，口腔、阴道分泌物中和肺部表面产生了中等水平的粘膜IgA抗体。

目前研究的C群脑膜炎球菌多糖结合物主要以TT或CRM197为载体，大肠杆菌不耐热肠毒素LT-K63只是作为佐剂来增强结合物的免疫原性。目前尚未见到以此类蛋白为载体蛋白的细菌多糖结合物。因此，目前要研究同时具有保护性抗原和佐剂功能的多糖载体蛋白、进而改善和延伸现有多糖结合疫苗的功能正日益成为热点。以这类蛋白为载体的多糖蛋白结合疫苗具有重要的实际应用意义和广阔的市场前景。

发明内容

本发明的目的是提供一种多糖结合疫苗。

本发明的目的还在于提供该多糖结合疫苗的制备方法。

为了实现本发明的目的，本发明提供一种多糖结合疫苗，包含细菌多糖与载体蛋白的化学偶联物，其中所述载体蛋白为细菌粘膜侵袭相关蛋白。

优选地，所述载体蛋白选自大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)、空肠弯曲菌鞭毛分泌蛋白A1(FspA1)、空肠弯曲菌鞭毛分泌蛋白A2(FspA2)、肺炎球菌表面蛋白(PspA)和肺炎球菌表面黏附素(PsaA)。

优选地，所述细菌多糖选自脑膜炎球菌多糖、嗜血流感杆菌多糖和肺炎球菌多糖。