[发明专利]雌二醇、雌三醇和己烯雌酚三联检测卡及其检测样品的处理方法

说明书

  

技术领域

本发明涉及一种检测雌激素类兽药的器具，特别是涉及一种雌二醇、雌三醇和己烯雌酚三联检测卡及其检测样品的处理方法，属于雌激素类兽药残留检测技术领域。

背景技术

人类对动物内分泌干扰物所造成的环境污染和危害的普遍认知和系统研究还不到十年的历史，但越来越多的研究表明，具有内分泌干扰性的污染物不断富集所造成的污染正通过各种途径给人类和野生动物带来危害，且其已在世界范围内的自然水体，城市污水处理系统及供水系统中被广泛检出。

其中尤以雌性激素污染更为严重，目前应用最广的主要有天然激素中的雌二醇、雌三醇及人工合成的己烯雌酚。

雌二醇是天然雌激素的主要成分，因其可以促进动物生长和提高畜禽瘦肉比，而在畜牧业中有应用。它可在动物体内残留，通过食物链危害人体健康，使女性儿童提前发育，男性儿童乳腺组织发育女性化，男性生殖系统异常化，引起病变，并导致女性乳腺癌和子宫内膜异位症发生率上升，且存在明显致癌性，欧美等发达国家相继禁止使用雌二醇作为饲料添加剂。

雌三醇是广泛存在于人和动物体内的一种类固醇激素，在检测食品特别是动物食品中这种激素的含量，保障食品卫生与人类健康方面有重要的意义和作用。

己烯雌酚是第一个口服有活性的人工合成雌激素。但由于其具有促进动物生长，增加蛋白质沉积和提高饲料转化率的作用，也被作为促生长剂，广泛应用于畜牧养殖业。己烯雌酚残留会使正常人的生理功能发生紊乱，更严重的是影响儿童正常的生长发育。近期研究发现，己烯雌酚能引发动物和人的癌症和致畸毒性，且妊娠期间使用还会引起后代生殖系统疾病。因此，世界许多国家禁止在饲料中使用己烯雌酚来促进动物生长。

这三类激素大都可以促进少女早熟，因此，对食品中尤其是对畜禽产品进行这几类雌激素检测是很有必要的。

目前，现有技术对于这三类雌激素类饲料添加剂的检测主要依赖化学仪器分析、放射免疫检测试剂盒及酶免疫检测试剂盒，这些方法操作过程繁琐、时间长，操作人员须具有一定的专业技术知识才能操作，因此应用范围受限。也有单独检测雌二醇、雌三醇及己烯雌酚的检测试纸条，但到目前为止，没有同时检测这三种物质的检测器具。

发明内容

本发明的目的在于提供一种操作简便快捷、成本低、携带方便、非专业人员也能操作及可进行现场检测的胶体金试纸，且能同时检测三类雌性激素，克服现有技术操作繁琐、专业要求高及只能逐一单项检测的缺陷。

本发明的技术方案：一种雌二醇、雌三醇和己烯雌酚三联检测卡：它在长条扁平薄壳状的检测卡外壳1中设置测试条2，检测卡外壳表面有检测窗孔3和加样孔4，测试条2是由支承背板5上通过不干胶在其上依次粘贴样品垫8、胶体金膜11、10、7、硝酸纤维素膜6和吸水膜9所组成；支承背板中部叠置粘贴硝酸纤维素膜6，支承背板一端叠置粘贴吸水膜9，另一端叠置粘贴样品垫8，吸水膜内端与样品垫内端各自分别与硝酸纤维素膜搭接，在样品垫与硝酸纤维素膜的搭接部，两者之间夹置粘贴三段胶体金膜11、10、7；胶体金膜11、10、7依次是含抗雌二醇抗体胶体金标记物的玻璃纤维膜、抗雌三醇抗体胶体金标记物的玻璃纤维膜、及抗己烯雌酚抗体胶体金标记物的玻璃纤维膜，硝酸纤维素膜上有三条检测带和一条质控带，依次是：含雌二醇蛋白质偶联物检测带12，含雌三醇蛋白质偶联物检测带13，含己烯雌酚蛋白质偶联物检测带14，质控带15，质控带为抗兔抗体或抗鼠抗体，测试条置入检测卡外壳内，样品垫正对加样孔，硝酸纤维素膜正对检测窗孔。

所述的雌二醇、雌三醇和己烯雌酚三联检测卡检测样品的处理方法，检测样品为尿液样品、饲料样品或动物组织、肉、肝脏样品，对于各种不同的检测样品有不同的处理方法；

尿液样品的处理方法：尿液直接用作检测样品，浑浊状态的尿液用滤纸过滤，取清亮上清液作测试样品样品，澄清的尿液直接作测试样品；测试样品滴入加样孔后用于检测。

饲料样品的处理方法：称取0.5克饲料样品，加入1mL样品抽提液，在试管中搅拌1分钟，静置10分钟后，取清亮上清液作测试样品滴入加样孔后用于检测。

动物组织、肉、肝脏样品的处理方法：取1g剪碎或匀浆过的动物组织、肉、肝脏样品，加入含1mL样品抽提液的试管中，扭紧管盖，振摇样品1分钟后，经100℃水浴加热5分钟，冷却至室温，取清亮的中间部分作测试样品滴入加样孔后用于检测。

所述样品抽提液为pH 7.0、浓度50mmol/L Tris-HCL缓冲液。