[发明专利]鉴定地衣芽孢杆菌BL63516菌株的专用RAPD引物、鉴定方法及鉴定用基因序列有效
| 申请号： | 201010549709.9 | 申请日： | 2010-11-18 |
| 公开（公告）号： | CN102010909A | 公开（公告）日： | 2011-04-13 |
| 发明（设计）人： | 汲涌;李显林;苏显英;李雪龙 | 申请（专利权）人： | 东北制药（沈阳）科技发展有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11;C12N15/31 |
| 代理公司： | 沈阳维特专利商标事务所 21229 | 代理人： | 甄玉荃 |
| 地址： | 110027 辽宁省沈阳*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 鉴定 地衣 芽孢 杆菌 bl63516 菌株 专用 rapd 引物 方法 基因 序列 | ||
1.一种鉴定地衣芽孢杆菌BL63516菌株的专用RAPD引物，其特征在于：该引物的核苷酸序列为5-GAACCTGCGG-3或5-TCACGTCCAC-3。
2.根据权利要求1所述的鉴定地衣芽孢杆菌BL63516菌株的鉴定方法，其特征在于：以样品总DNA为模板，利用引物的核苷酸序列为5-GAACCTGCGG-3或5-TCACGTCCAC-3中任一种进行PCR扩增，以琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物，根据PCR扩增产物判定样品是否为地衣芽孢杆菌BL63516；利用引物5-GAACCTGCGG-3若在4500-6000bp位置产生一条特征条带则判定为阳性；利用引物5-TCACGTCCAC-3若在1460bp位置产生一条特征条带则判定为阳性。
3.根据权利要求2所述的鉴定地衣芽孢杆菌BL63516菌株的鉴定方法，其特征在于：所述PCR反应体系为25μL，由2.5μL的10×Taq Buffer(μL)、1.5-1.75μL浓度为25mmol/L的MgCl2溶液、0.5μL浓度为10mmol/L的dNTP、0.25μL浓度为5U/μL 的Taq DNA聚合酶、1μL浓度为0.5pmol/μL的随机引物、1μL浓度为20-30ng/μL的DNA模板和余量的无菌双蒸水组成；PCR反应条件：95℃预变性3min；94℃变性45s、36℃退火60s、72℃延伸2min，共40个循环；72℃修复延伸10min。
4.根据权利要求1所述的鉴定地衣芽孢杆菌BL63516菌株的基因序列，其特征在于：利用引物的核苷酸序列5-TCACGTCCAC-3进行扩增，用于鉴定BL63516基因序列为：
TCACGTCCACTTACGACGGAATGGCGCTTGCGCAGGCAATCATCGAGTACGTTCACGAGCACATCGGCGCGAAGACTTTATTTTCCACTCACTATCACGAGCTGACATCCCTTGAAGAAAAGCTTGCCGACTTGAAGAATGTTCACGTTCGTGCGGAAGAATACGAAGGAAAGGTCGTATGCCTTCACCAGATAAAAGAAGGCGCAGCAGATAAAAGCTACGGTATCCATGTCGCGCAGCTTGCCGAATTGCCCGACGGTTTGATCAGCAGGGCGAAAACGATTCTGAAAGAGCTTGAATCCGGCGCCAAAGAAGCGGTTCCATCAACGGCTCCGAATACGGTAAAAGAGGCGGCGGAAGAAGTCGCGGCAACTGTTGCAGATCAACCGGCCCAGCTGTCATTTTTTGAAACGGACAAGCCGAAAGAAAAAGAGACGAAGCTCTCCAAAAAAGAGCAGGCTGTTTTAGCCGAATTTAAAACGATGGATCTGCTCGATATGACGCCTATACAAGTCATGAATGAACTGTACAGGCTGCAAAAAAAATTAAAGTAATAAAGAGGTGACCCAACTTGGCAAAAATTGTTCAGCTGCCAGACGATTTATCGAATAAAATCGCGGCGGGTGAAGTAGTGGAAAGGCCTGCGTCGGTCGTCAAAGAGCTTGTCGAAAATGCAATCGATGCGAACAGCTCCGTGATTGAAATCGATGTTGAAGAAGCGGGTCTCGCCTCGATTAAAGTGCTTGACGACGGCGAAGGGATGGATGCAGAAGACTGCAGAACGGCTTTTTTGCGTCATGCCACAAGCAAAATCAAAGACGAAAACGATCTGTTTCGCGTCAGAACGCTCGGATTTCGCGGAGAAGCTTTGCCAAGTATCGCGTCTGTCTCACATCTAAGCATTAAAACGAGCACCGGAGAAGGAGCAGGCACCCATTTGACGCTTCAGGGGGGGAGAATCATTTCCGAGCAAAAAGCGTCAAGCCGCAGAGGAACCGAAATTACGGTTACCAATCTGTTTTTTAATACGCCGGCAAGGCTGAAATATATGAAAACGATCCATACGGAGCTTGGCAACATTACAGATGTGGTCAACAGAATTGCCCTTGCCCACCCGGAAGTTTCGATCAGGCTGCGTCATCAAGGGAAAACGCTTCTGCAGACAAACGGAAACGGCGATGTCCGCCACGTGCTTGCGGCGATTTACGGCACGGCGGTTGCCAAAAAAATGCTCCCGCTTGAAGCGAGATCTCTTGATTTTGAAGTGAAAGGCTATATCGCCCTTCCCGAAATTACGCGTGCATCGCGAAATTACATGTCATCTGTCGTCAACGGCAGATACATTAAAAATTTTCCGCTCGTGAAAGCGATCCACGAGGGCTACCATACGCTTCTTCCGATCGGCCGCCATCCGATCACGTTTATTGAAATCAACATGGACCCGCTGCTTGTGGACGTGA
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