[发明专利]即用型沙门菌鉴定平板的试剂盒、制备及使用方法

权利要求书

1.即用型沙门菌鉴定平板的试剂盒，其特征是包括：

1）、沙门菌特异性酶-底物筛选培养基：琼脂17.0g，胰化酪蛋白胨10.0g，蛋白胨10.0g，酵母浸出物3.0g，氯化钠5.0g，5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-吡喃半乳糖苷250mg，辛酸盐250mg，磺胺吡啶0.5g，蒸馏水1000ml；

2）、针对沙门菌特异性“O” 相抗原生长的选择性培养基：胰化酪蛋白胨12.0g，蛋白胨5.0g，酵母粉3.5g，淀粉1.0g，氯化钠5.0g，琼脂14.0g，蒸馏水1000ml；

3）、针对沙门菌特异性“H” 相抗原生长的选择性培养基：胰化酪蛋白胨17.0g，植物蛋白胨3.0g，氯化钠5.0g，K₂HPO₄ 2.5g，葡萄糖2.5g，去氧胆酸盐0.3g，琼脂6.0g，蒸馏水1000ml。

2.权利要求1所述的即用型沙门菌鉴定平板的试剂盒的制备方法，其特征是：

1）、沙门菌特异性酶-底物筛选培养基制备：取琼脂粉17.0克、胰化酪蛋白胨10.0g、蛋白胨10.0g、酵母粉3.0g、氯化钠5.0g置990ml蒸馏水中加热溶解煮沸2次后，称取5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-吡喃半乳糖苷250mg溶解于4mlTri.HCl，pH8.0；称取辛酸盐250mg溶解于4ml蒸馏水中，再称取磺胺吡啶0.5g溶解于2ml0.01摩尔浓度NaOH中，待加热培养基冷却至50℃一并加入后混匀，调整pH至7.2，按冷却至25℃后测量值为标准，倾注1ml于专用无菌一次性平板的“B”位置，备用；

2）、针对沙门菌特异性“O”相抗原生长的选择性培养基制备：将胰化酪蛋白胨12.0g，蛋白胨5.0g，酵母粉3.5g，淀粉1.0g，氯化钠5.0g，琼脂14.0g，蒸馏水1000ml，加热溶解后矫正pH至7.1±0.1，经加热加压灭菌后倾注6ml于专用无菌一次性平板的“C”位置备用；

3）、针对沙门菌特异性“H”相抗原生长的选择性培养基制备：将胰化酪蛋白胨17.0g，植物蛋白胨3.0g，氯化钠5.0g，K₂HPO₄ 2.5g，葡萄糖2.5g，去氧胆酸盐0.3g，琼脂6.0g，蒸馏水1000ml，加热溶解后矫正pH至7.3±0.2，经加热加压灭菌后倾注6ml于专用无菌一次性平板的“A”位置备用。

3.权利要求1所述的即用型沙门菌鉴定平板的试剂盒的使用方法，其特征是：包括以下步骤

疑似沙门菌培养物分别接种于无菌一次性平板“A”、“B”、“C”三个区域，A为点种、B和C为划线接种，36℃培养18-24h后，所有的沙门菌在B区域均呈现为中等大小、湿润、边缘光滑的酒红色菌落；C区域为白色培养物；A区域为蔓延生长培养物，如果连续3代培养未见蔓延生长者报告为沙门菌某一单相菌变种。

4.权利要求1所述的即用型沙门菌鉴定平板的试剂盒的使用方法，其特征是：包括以下步骤：

挑取无菌一次性平板C区域的培养物进行“O” 相因子血清的玻片凝集反应鉴定特异性O抗原；挑取无菌一次性平板A区域的边缘培养物进行“H”相因子血清的玻片凝集反应鉴定特异性H1和H2抗原，最后根据抗原鉴定的结果报告沙门菌分型结果。