[发明专利]从枇杷叶中分离提取≥98%熊果酸的工艺

说明书

技术领域

本发明涉及熊果酸的提取，具体是从枇杷叶中分离提取≥98%熊果酸的工艺。

背景技术

熊果酸，又名乌索酸、乌苏酸，属α-香树脂醇型五环三萜化合物。白色，棱柱状结晶（无水乙醇），细毛样针状结晶（稀乙醇）。熔点285℃~287℃，比旋光度[α]D 25±67.5°（C=1，1mol/L氢氧化钠中）。熊果酸为乌苏烷型五环三萜，分子式C₃₀H₄₈O₃，分子量456.68，其结构式如下：

熊果酸具有显著的保肝、抗肝炎作用。临床表现具有显著而迅速地降低谷丙转氨酶、血清转氨酶、消退黄疽、增进食欲、抗纤维化和恢复肝功能的作用，具有见效快、疗程短、效果稳定的特点。“抗肝炎中药一类新药乌索酸及其制剂的研究开发”课题被列入2002年国家“863”计划，以熊果酸为主要成分的女贞叶提取物制成的胶囊剂主要用于肝肾阴虚、阴虚阳亢症所致的原发性高脂血症，是我国批准的二类新药。

近年的研究发现熊果酸能明显抑制HL－60细胞增殖，可诱导其凋亡；能使小鼠的巨噬细胞吞噬功能显著提高。体内试验证明，熊果酸可以明显增强机体免疫功能。说明熊果酸的抗肿瘤作用广泛，极有可能成为低毒有效的新型抗癌药物。

熊果酸还具有抗氧化、抗菌、抗炎、抗病毒；降血脂、抗动脉粥样硬化、降血糖、抗糖尿病；抑制艾滋病毒；镇静、安定、增强免疫等显著生物活性。

此外，熊果酸对精子有一定毒性作用，它能破坏胆间桥的肌动蛋白，打开桥键，产生共质体，抑制精子的形成, 利用这一作用有望开发成男性避孕药。

目前国内有很多生产熊果酸的文献报导，原料来源也多种多样。如有枇杷叶、毛泡桐叶、苦丁茶叶等；工艺也多种多样，如超临界萃取法、沉淀吸附法、超声波提取法、常温超高压提取法等。但

1、不易实现工业化生产：

熊果酸在植物中的含量低，只有0.1~1.0%，考虑到原料来源的可持续性和经济性，目前比较可行的是从枇杷叶中分离提取熊果酸，因其含量相对较高而适宜生产推广。但是由于原料含量低，又是以叶为原料，叶中富含叶绿素等强亲脂性成分，超临界萃取法并不能有效将叶绿素等杂质与熊果酸等有效成分有效分离开来，而只能得到低含量混合品。沉淀吸附法工艺过程非常简单，生产中只需加入一种试剂即可解决亲脂性成分，至于其适用性，还有待于进一步研究。目前生产中尚未有超声波提取设备，并且此法噪声大，易损害听力，不利于劳动安全与保护。常温超高压提取法由于需要高压，在生产过程中存在不安全因素，需要防爆车间与耐高压设备，不仅投入大，也不易于在生产中实现。

文献普遍报导分离熊果酸用到石油醚、氯仿、丙酮等有毒、易燃易爆的溶剂，在生产中不易于控制，安全要求特高。而且这些溶剂带有毒性，对人危害大，又易于挥发，极大地提高了生产成本。也有文献报导用制备薄层、硅胶层析分离制备熊果酸，但是这些一方面制备量非常小，另一方面生产周期特别长，再者需要用有毒有害溶剂来洗脱或展开，属于实验室的分离制备方法，根本无法在生产中实现。

2、提取技术不够完善：

文献所报导的多数分离提取熊果酸，均停留在简单的正交设计等方案得到熊果酸粗提物，含量不到10%。这对于植物提取分离而言，只是一个开端。为生产出高附加值的产品，需要自原料开始，分离制备到纯度95%以上的有效成分单体。

3、纯度不高：

目前多数文献报导的能在生产中实现的熊果酸产品，含量为92%~97%，少见有98%以上的报导。

发明内容

本发明的目的是为克服现有技术的不足，而提供一种从枇杷叶中分离提取≥98%熊果酸的工艺。这种提取工艺为工业化寻找了一种切实可行的工艺路线，提取纯度高，熊果酸的含量达到HPLC级98%以上，可以变废为宝，提高资源利用率。

本发明从枇杷叶中分离提取≥98%熊果酸的工艺，是以新鲜的或晒干处理过的枇杷叶为原料经切丝→醇提过滤→浓缩沉淀→离心过滤→醇溶过滤→离子交换树脂纯化→调中浓缩→洗涤干燥→硅胶精制→脱色过滤→浓缩沉淀→结晶→真空干燥制成。其提取工艺包括如下步骤：

（1）切丝：取将鲜的或晒干处理过的枇杷叶切丝；

（2）醇提过滤：将切丝后的枇杷叶投入提取罐中，用80%-85%乙醇溶液提取3次，提取温度为70-80℃，过滤，合并前2次滤液，第3次滤液套提，作为下批物料的第1次提取液，残渣弃去；

（3）浓缩沉淀：将前2次合并滤液真空减压浓缩至料液比1︰0.7-1.2，控制真空度≥0.07Mpa，温度50℃~60℃，然后静置沉淀5h以上；