[发明专利]一种川贝母培养物快速生产中的有效除菌方法

权利要求书

1.一种川贝母培养物快速生产中的有效除菌方法，其特征在于包括下列步骤：

(1)染菌材料的选取：定期观察川贝母培养材料生长状况，一旦肉眼观察到材料或培养基中有细菌产生时，即将培养材料取出；

(2)预处理：将取出的培养材料先用无菌水冲洗2～5次，并用无菌滤纸反复吸干材料表面的水分，再放入头孢噻肟钠浓度为200～500mg·L^-1的抗生素水中浸泡6～12min，其间不停振荡，取出后用无菌滤纸反复吸干材料表面的水分；

(3)液体除菌：将预处理后的材料接入含有抗生素的MS+6-BA 2.0mg·L^-1+NAA 0.3mg·L^-1+蔗糖30g·L^-1液体培养基中培养1～2周，摇床转速100～120r·min^-1，培养条件为每天光照8～12小时，光照强度为1000～1600lx，温度18～22℃，所述抗生素的种类及浓度为头孢噻肟钠300mg·L^-1～800mg·L^-1或头孢噻肟钠150mg·L^-1～300mg·L^-1+头孢曲松钠150mg·L^-1～300mg·L^-1；

(4)第一次固体除菌：取出经液体除菌的材料，用无菌滤纸反复吸干材料表面的水分，再接入含有与(3)步骤相同种类和浓度的抗生素的MS+6-BA 2.0mg·L^-1+NAA 0.3mg·L^-1+蔗糖30g·L^-1+琼脂6.5g·L^-1固体培养基中进行第一次除菌培养，培养时间为25～30天，培养条件为每天光照8～12小时，光照强度为1000～1600lx，温度18～22℃；

(5)第二次固体除菌：取出经(4)步骤除菌后的材料，转接入含有与(4)步骤相同种类但浓度减半的抗生素的MS+6-BA2.0mg·L^-1+NAA0.3mg·L^-1+蔗糖30g·L^-1+琼脂6.5g·L^-1固体培养基中进行第二次除菌培养，培养时间为25～30天，培养条件为每天光照8～12小时，光照强度为1000～1600lx，温度18～22℃；

(6)除菌检测：取出经(5)步骤除菌后的材料，转接入无抗生素的MS+6-BA 2.0mg·L^-1+NAA 0.3mg·L^-1+蔗糖30g·L^-1+琼脂6.5g·L^-1的固体培养基中进行继代培养，在培养25～30天后观察材料除菌情况，并统计除菌率。