[发明专利]人脐带间充质干细胞抗肝纤维化注射液及其制备方法

权利要求书

1.一种人脐带间充质干细胞抗肝纤维化注射液，其特征在于，由10％-50％人血白蛋白原液和49.5％-89.5％的勃脉力A液、0.5％肝素钙组成，其中所述人血白蛋白原液的浓度为10％，1ml注射液中含有人脐带间充质干细胞6×10⁵-7×10⁵个。

2.如权利要求1所述的人脐带间充质干细胞抗肝纤维化注射液，其特征在于，所述注射液由20％人血白蛋白原液和79.5％勃脉力A液、0.5％肝素钙组成，其中该注射液中的人脐带间充质干细胞的浓度为6.8×10⁵个/ml。

3.如权利要求2所述的人脐带间充质干细胞抗肝纤维化注射液，其特征在于，所述注射液使用静脉输注方式，按照人脐带间充质干细胞0.5×10⁶-1×10⁶个细胞/公斤体重注入患者体内。

4.权利要求1所述的人脐带间充质干细胞抗肝纤维化注射液的制备方法，其特征在于，包括：

提供间充质干细胞保存液，预冷、备用，所述的间充质干细胞保存液包括人血白蛋白原液、勃脉力A液和肝素钙；

提供人脐带间充质干细胞；

将获得的人脐带间充质干细胞加入到间充质干细胞保存液中；

通过重悬的方式，调整加入到间充质干细胞保存液中的人脐带间充质干细胞数量为6×10⁵-7×10⁵个细胞/1ml。

5.如权利要求4所述的人脐带间充质干细胞抗肝纤维化注射液的制备方法，其特征在于，所述间充质干细胞保存液是由10％-50％的浓度为10％的人血白蛋白原液和49.5％-89.5％勃脉力A液、0.5％肝素钙混匀组成。

6.如权利要求5所述的人脐带间充质干细胞抗肝纤维化注射液的制备方法，其特征在于，所述间充质干细胞保存液由20％人血白蛋白原液和79.5％勃脉力A液、0.5％肝素钙组成。

7.如权利要求6所述的人脐带间充质干细胞抗肝纤维化注射液的制备方法，其特征在于，所述人脐带间充质干细胞通过如下的方式制备：

(1)取放有第3-7代人脐带间充质干细胞的培养瓶；

(3)吸弃培养瓶中原有培养基，每瓶用10ml的D-hank’s平衡盐液缓冲液清洗两次，吸弃洗液；

(4)每瓶中加入1ml胰酶-EDTA，放入37℃孵箱中5-7分钟；

(5)在倒置显微镜下观察细胞，用手掌轻轻拍打培养瓶确保人脐带间充质干细胞完全消化下来；

(6)每瓶中加入0.2ml血清终止消化；每瓶中加入10ml的D-hank’s平衡盐液，反复吹打，制得细胞悬液；

(7)将细胞悬液移入离心管中，以900rpm的离心速度离心5秒，离心结束，吸弃上清，获得人脐带间充质干细胞。

8.如权利要求7所述的人脐带间充质干细胞抗肝纤维化注射液的制备方法，其特征在于，通过如下的方式调整干细胞保存液中的细胞量：

(8)用间充质干细胞保存液重悬人脐带间充质干细胞，用微量加样枪吸取少许细胞悬液，用做细胞计数及细胞活力检测，舍弃死细胞，并计数活细胞；如活细胞数浓度为6×10⁵-7×10⁵个细胞/1ml，进行步骤(10)；否则继续用步骤(9)再进行调整；

(9)然后以900rpm的离心速度离心5秒，吸弃上清，加入保存液，使细胞浓度为6×10⁵-7×10⁵个细胞/1ml，再进行步骤(10)；

(10)将调整后的6×10⁵-7×10⁵个细胞/1ml的人脐带间充质干细胞抗肝纤维化注射液进行封装保存。

9.如权利要求8所述的人脐带间充质干细胞抗肝纤维化注射液的制备方法，其特征在于，吸弃培养瓶中原有培养基前需对培养瓶进行消毒处理，具体为用酒精棉球擦拭培养瓶盖口四周，然后旋开瓶盖。

10.如权利要求9所述的人脐带间充质干细胞抗肝纤维化注射液的制备方法，其特征在于，所述细胞计数及细胞活力检测具体为：将细胞悬液和0.4％的台盼兰溶液按1∶1进行混合；轻轻混匀，1分钟后，在显微镜下用血球计数板计数细胞；活细胞排斥台盼兰，染成蓝色的细胞是死细胞。