[发明专利]一种MAP疫苗及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种生物疫苗，尤其涉及一种MAP疫苗及其应用。 

背景技术

恶性肿瘤是危害人类健康的主要疾病之一，而肿瘤的浸润和转移是肿瘤患者死亡的主要原因。传统的手术、放、化疗的疗效又不尽人意，随着对肿瘤生物学行为的深入研究及生物技术的迅速发展，以肿瘤免疫治疗为主的肿瘤的生物治疗已成为肿瘤治疗的第四种模式，而肿瘤疫苗是肿瘤生物治疗的重要方法。大量研究证明，利用肿瘤疫苗有效激活特异性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte，CTL)，是实现肿瘤主动免疫治疗的关键。但目前发现的肿瘤相关抗原大多具有组织特异性，如PSA只针对前列腺癌、AFP只针对肝癌等，以这些抗原来进行免疫治疗，只能对相应的肿瘤起作用，限制了以这些抗原为靶标的肿瘤疫苗的广泛应用。肿瘤抗原可以诱导机体的免疫应答，是肿瘤免疫治疗中疫苗研发的分子基础，寻找肿瘤特异性的共有抗原成为肿瘤免疫治疗关键问题。 

CD8+T细胞所识别的靶抗原需先经抗原递呈后，以“抗原肽-MHC I类分子”复合物的形式呈现于抗原递呈细胞(antigen presenting cell，APC)或靶细胞表面，才能被CD8⁺T细胞所识别。相应的与主要组织相容性复合物(major histocompatibility complex，MHC)I类分子结合的抗原肽即为CTL表位，随着对免疫应答分子机制的深入研究，人们已意识到机体的免疫细胞并不是一一对应于各种各样的病原体或天然抗原的整体分子，而是针对各种各样抗原分子的抗原表位(epitope)，蛋白质抗原是通过其表位来体现其免疫特异性。CTL表位作为抗肿瘤的新一代多肽疫苗，尤其是负载CTL表位的树突状细胞疫苗，被认为是最有希望的新一代肿瘤免疫治疗策略，已在临床实验中显示出一定的疗效。 

理想的肿瘤共有抗原(universal tumor-associated antigen)应符合：(1)在绝大多数肿瘤组织中表达从而可以广泛应用；(2)只表达于肿瘤细胞以避免自身免疫反应；(3)不表达于正常成熟组织以避免免疫耐受；(4)在肿瘤的发生发展过程中具 有不可替代的作用，以避免抗原缺失；(5)能诱导足够强度的免疫反应并导致肿瘤消退；(6)同时包含有MHC I和MHCⅡ类分子，从而可诱导CD4+和CD8+T细胞反应。 

近年来的研究表明，人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase，hTERT)可作为共有抗原靶标设计肿瘤疫苗。其原因如下： 

1、hTERT为端粒酶活性的限速成分，是癌细胞永生化的必要途径，在维持肿瘤继续分裂、增殖和生存中发挥重要作用。以hTERT制备疫苗，即便出现免疫逃逸而使hTERT表达下调，此变化本身就起到抑制肿瘤生长、转移的作用，同时也避免了抗原缺失的问题。 

2、hTERT在85％以上的恶性肿瘤及其癌前病变中过度表达，其异常表达或激活是肿瘤形成的重要原因之一，目前已筛选出hTERT的CTL表位包含有HLA(人类主要组织相容性抗原)-A2、A3或A24限制性，而大于75％的人群是HLA-A2、A3、A24限制性。因此如以hTERT为靶标的肿瘤疫苗，将具有更广泛的应用人群。 

3、hTERT在人体内少数正常的细胞组织(如某些上皮细胞、胸腺等)内有表达。理论上，针对这类自身蛋白的免疫治疗有可能产生hTERT阳性正常组织的自身免疫反应或特异性CTL的免疫耐受。但目前相关实验观察到的自身免疫反应或CTL自体耐受很少或没有。 

4、hTERT同时包含有MHCⅡ和MHC I类分子，并可诱导CD4⁺和CD8⁺T细胞反应。 

5、有研究发现，hTERT的高表达与肿瘤的不良预后、浸润转移均密切相关[Yu ST，et al.Int J Oncol 2009；35(2)：329-36.]。 

6、发现带有hTERT全长基因的腺病毒载体负载DC，以及带有hTERT全长基因和隐性表位的颗粒疫苗，在体内外均可以诱导产生hTERT特异性的细胞毒T淋巴细胞(CTLs)，对hTERT阳性的胃癌、结肠癌等多种癌细胞具有一定的杀伤效应，而对表达hTERT阴性的淋巴细胞和DC不具有杀伤效应[1、Chen L.JPathol.2009；217：685；2、Guo H，et al.BBRC，2007；357：1090]。由此可见，hTERT可以作为一种广谱的肿瘤相关抗原用于恶性肿瘤的免疫治疗，且具有特异、有 效、安全的特点。