[发明专利]一株邻苯二甲酸酯类化合物降解菌及其菌剂的生产方法

权利要求书

1.一株能够高效降解邻苯二甲酸酯类化合物的细菌菌株，其特征在于：该菌株分类命名为Diaphorobacter sp.，菌株编号：QH-6，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号：CGMCC No 4345。

2.权利要求1所述的Diaphorobacter sp. QH-6菌株，其特征在于：该菌株的16S rDNA基因序列已经递交到了GenBank数据库，登录号为HQ588349。

3.用权利要求1所述芽孢杆菌的菌剂生产方法，其特征在于，生产步骤包括：

(1)培养基配制：

菌种保藏培养基(固体，1L)：蛋白胨10g，酵母膏5g，氯化钠5g，琼脂20g，加水至1L，pH 7.0-7.5；

菌种活化培养基(液体，1L)：蛋白胨10g，酵母膏5g，氯化钠5g，加水至1L，pH 7.0-7.5；种子培养基(液体，10L)：酵母膏2g，DBP 1g，K₂HPO₄ 58g，KH₂PO₄ 30g，(NH₄)₂SO₄20g，MgCl₂ 1.6g，CaCl₂ 0.2g，Na₂MoO₄·2H₂O 0.024g，FeCl₃ 0.018g，MnCl₂·2H₂O 0.015g，pH＝6.8-75；

发酵培养基(液体，200L)：K₂HPO₄ 600g，KH₂PO₄ 300g，(NH₄)₂SO₄ 200g，MgCl₂ 16g，CaCl₂ 2g，Na₂MoO₄·2H₂O 0.24g，FeCl₃ 0.18g，MnCl₂·2H₂O 0.15g，酵母膏200g，糖蜜300g，加水至200L，pH 6.8-7.5；

以上培养基均在121℃灭菌15-30min；

(2)菌种活化：挑取邻苯二甲酸酯降解菌的菌种，在保藏培养基平板划线，于30℃培养，待长出明显的单菌落后，挑取单菌落在菌种活化培养基中，于30℃，150-200r/min摇床振荡培养12-24h；

(3)液体种子制备：向装有高温灭菌的种子培养基的发酵罐中，按照5％-10％的接种量接种邻苯二甲酸酯降解菌，于25-37℃，通空气培养12-24h，得到液体种子；

(4)液态发酵：向装有高温灭菌的发酵培养基的发酵罐中，按照5％-10％的接种量接种邻苯二甲酸酯降解菌，于25-37℃，通空气培养18-60h，得到活菌体培养物；

(5)菌剂制备：培养好的发酵液经细菌计数后，超滤浓缩至10¹⁰CFU/mL，灌装，于4℃保藏；使用时用水稀释50-1000倍。