[发明专利]从植物蒙自蕈树中提取的活性成分及其应用

说明书

技术领域：

本发明涉及一种从植物蒙自蕈树中提取的活性成分及其应用，属生物医药技术领域。

背景技术：

蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)属于芽孢杆菌科，芽孢杆菌属。该菌在自然界分布极广，研究表明，该菌能产生多种毒性物质，如肠毒素、溶血毒素等，由其引起的食物中毒涉及的食品种类很多，发生食物中毒潜在危险性大，这种由广泛存在的细菌引起的人的疾病受到关注。迄今已发现的抗生素主要来源于植物和微生物，其中许多已广泛用于治疗各种微生物感染性疾病。近年来由于病原菌的耐药性，原有的医用抗菌素在减退，因此不断开发新的抗生素受到重视。

蒙自蕈树(Altingia yunnanensis)属于被子植物门、双子叶植物纲、金缕梅亚纲、金缕梅目的金缕梅科(Hamamelidaceae)。别名青皮、青皮树(屏边)、白皮树、苦木梨(河口)，主要分布于云南等地。目前蒙自蕈树(A.yunnanensis)主要用途为当地材用树种，未见有关该植物具有抗蜡样芽孢杆菌活性的公开报道。

发明内容：

本发明的目的是从蒙自蕈树植物产生的代谢产物中，筛选出对人体病原细菌蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)具有强烈抑制作用的活性成分，作为制备抑制人体病原细菌蜡样芽孢杆菌制剂的应用。

本发明是这样实现的：

1活性成分的制备：

本发明的活性成分经如下步骤得到：

a.将蒙自蕈树的枝或叶用水洗干净后放入烘箱，在60℃温度下烘烤12小时；

b.将烘干后的蒙自蕈树的枝或叶切碎，放入三角瓶内，用100％甲醇浸泡，在40℃的水浴锅上提取，第一次浸泡提取的时间为2小时，第二次和第三次的时间分别为4和8小时；

c.将三次浸提的提取液合并后，在60℃温度下浓缩后得浸膏；

d.将浸膏用甲醇溶解，定容至10mg/ml，置于冰箱中4℃保存备用。

2、制备试验用的病原细菌

蜡样芽孢杆菌(B.cereus)：将蜡样芽孢杆菌接种于LB液体培养基(牛肉膏：3克，蛋白胨：10克，氯化钠：5克，自来水1000ml，pH 7.0-7.2)中，于37℃下培养24小时，冻于4℃冰箱中备用。做活性时将LB固体培养基(牛肉膏：3克，蛋白胨：10克，氯化钠：5克，琼脂：18克，自来水1000ml，pH 7.0-7.2)倒入9cm的平板中，待培养基凝固后，取200μL蜡样芽孢杆菌菌液用涂布棒涂布均匀备用。

3、试验方法

滤纸片扩散法：在无菌操作台上用微量注射器将样品注入纸片(做三个剂量，1mg/disc，0.5mg/disc，0.1mg/disc)，用电吹风将纸片吹干待溶剂挥发后，置于涂布好病原菌的LB平板上，37℃下培养24小时后，观察抑菌结果，测量抑菌圈的大小(含纸片的直径0.6cm)。同时在纸片上加入提取过程中使用过的溶剂甲醇作为对照，同时还做空白纸片对照。整个实验重复3次，取3次实验结果的平均值。

将试验获得的活性浸膏在100℃沸水中加热30分钟后，用甲醇溶解制备成浓度为10mg/ml的活性成分，用同样的方法做抑菌试验。

本发明的活性提取物对人体病原菌蜡样芽孢杆菌具有较强的抑制作用，能作为制备抑制人体病原细菌蜡样芽孢杆菌制剂的应用，能开发为新的医用抗生素。

具体实施方式：

本实施例所用的植物蒙自蕈树，采自中国科学院昆明植物研究所植物园内。

实施例一：

蒙自蕈树的枝用水洗干净后放入烘箱，在60℃温度下烘烤12小时。将10克烘干后的枝切碎，放入三角瓶内，用100ml 100％甲醇浸泡，在40℃的水浴锅上提取。第一次浸泡提取的时间为2小时，第二次和第二次的浸泡提取时间分别为4小时和8小时。将三次浸提的提取液合并后，在60℃温度下浓缩得浸膏。该浸膏用甲醇溶解，制备成浓度为10mg/ml，用于做活性测定。同时做对照，结果见表1。

表1  蒙自蕈树枝的提取物对蜡样芽孢杆菌的抑菌作用

-没有抑菌圈出现

结果表明：本发明提取的活性成分对人体病原细菌蜡样芽孢杆菌有明显的抑菌活性，提取物在1mg时出现强的抑菌活性，抑菌圈的大小为1.2cm，0.5mg时也出现较强抑菌活性，抑菌圈的大小为1.0cm。

实施例二：

基本同实施例一，不同之处是所用的材料为蒙自蕈树的叶。结果见表2。

表2  蒙自蕈树叶的提取物对蜡样芽孢杆菌的抑菌作用

-没有抑菌圈出现