[发明专利]一种用于分离纯化高酶活人类DNA聚合酶δ的免疫亲和层析柱及分离纯化方法无效
| 申请号： | 201010556585.7 | 申请日： | 2011-03-31 |
| 公开（公告）号： | CN102086450A | 公开（公告）日： | 2011-06-08 |
| 发明（设计）人： | 周亚竟;陈慧卿;麦维军;何远清;刘晓勇;陈克平;姚勤;陈焰;李骁;王玉珏 | 申请（专利权）人： | 江苏大学 |
| 主分类号： | C12N9/12 | 分类号： | C12N9/12 |
| 代理公司： | 南京知识律师事务所 32207 | 代理人： | 卢亚丽 |
| 地址： | 212013 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 分离 纯化 活人 dna 聚合 免疫 亲和 层析 方法 | ||
1.一种用于分离纯化高酶活人类DNA聚合酶δ的免疫亲和层析柱，其特征在于，是将抗p125的多克隆抗体与CarboLinkTM Coupling Gel耦联而制得。
2.如权利要求1所述的免疫亲和层析柱，其特征在于，其中所述的抗p125的多克隆抗体是通过下法方法制得：利用Bac-to-Bac系统，制备含6个组氨酸标签的DNA聚合酶δ催化大亚基p125作为抗原，在成年新西兰兔中制备抗p125的抗血清，纯化抗血清获得高纯度的多克隆抗体。
3.按照权利要求2所述免疫亲和层析柱，其特征在于：利用Bac-to-Bac系统制备抗原所用的供体质粒是pFastBacHTc。
4.按照权利要求2所述免疫亲和层析柱，其特征在于：抗血清的纯化是指饱和硫酸铵沉淀法和Immobilized Protein A柱纯化法相结合。
5.一种高酶活人类DNA聚合酶δ的分离纯化方法，其特征在于：利用Bac-to-Bac系统，制备含人类聚合酶Pol δ四种亚基的重组病毒，共感染宿主细胞Sf-9，使得各亚基在细胞中表达和装配；收集感染的Sf-9细胞，经超声波裂解、高速离心后，收集上清，经过权利要求1所述的免疫亲和层析柱和离子交换层析柱分离纯化出高纯度的目的产物。
6.按照权利要求5所述方法，其特征在于：所述的人类DNA聚合酶Pol δ的4个亚基分别为p125、p68、p50和p12，相应的cDNA分别源自人类DNA聚合酶基因POLD1、POLD3、POLD2和POLD4。
7.按照权利要求1所述方法，其特征在于：所述的离子交换层析柱是指FPLC Mono Q。
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