[发明专利]快速检测婴幼儿配方奶粉中阪崎肠杆菌的PCR方法及试剂盒无效
| 申请号： | 201010556679.4 | 申请日： | 2010-11-23 |
| 公开（公告）号： | CN102127592A | 公开（公告）日： | 2011-07-20 |
| 发明（设计）人： | 李雪玲;赵建设;陈勇;张莉;樊成;唐欣;蒋宏伟;舒静;王慧芳 | 申请（专利权）人： | 陕西省产品质量监督检验所 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 西安文盛专利代理有限公司 61100 | 代理人： | 佘文英 |
| 地址： | 710054 陕*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 快速 检测 婴幼儿 配方 奶粉 中阪崎肠 杆菌 pcr 方法 试剂盒 | ||
1.一种快速检测婴幼儿配方奶粉中阪崎肠杆菌的PCR方法，其特征是包括以下几个步骤：
(1)阪崎肠杆菌的培养；
(2)制备阪崎肠杆菌基因组DNA；
(3)构建阪崎肠杆菌重组质粒，作为标准品绘制标准曲线进行定量；
(4)构建ompA内标重组质粒，与目的基因在同一反应体系内同时扩增，监测反应体系，排除假阴性；
(5)建立分子信标荧光定量技术检测婴儿配方奶粉中阪崎肠杆菌的方法，优化反应条件；
(6)对3种从婴儿配方奶粉中高效提取阪崎肠杆菌的方法进行比较；
(7)确定分子信标荧光定量方法的灵敏度；
(8)人工污染样品，确定检测限；
(9)实际检测，确定该方法的特异性、灵敏度、符合率。
2.如权利要求1所述的快速检测婴幼儿配方奶粉中阪崎肠杆菌的PCR方法，其特征是阪崎肠杆菌基因所包含的ompA基因的核苷酸序列为
ccgggctaaa aattcactca agaatggtgc attaattgtt tttaggataa atcctggtac 60
agatttgttc tcgcgctctg cgttagagtg attgtggcga atgaacggcc agacgggcga 120
tttcgtccgg tttcacactt tacgagtgtt taaaattgcc gcaaaaatgt taaattttgc 180
tttcgcaagt tgtttttttt catatgcctg acggacttca cacttgtaag tttccaacta 240
cgttgtagac tttacctcgc cagggtgctc atcaataaac cgacaatatc ggtagagtaa 300
ccattgagct ataaccccgg tgaaggattt aaccgtgaac ttttcctccc ggaaaagcgc 360
atggcctttt tggatgataa cgaggcgcaa aaaatgaaaa agacagctat cgcgattgca 420
gtggcactgg ctggcttcgc taccgtagcg caggccgcac cgaaagataa cacctggtat 480
gcaggcggca aactgggctg gtcccagttc cacgataccg gttttattcc taacgacggt 540
ccgactcacg aaagccagct gggcgcaggc gcgttcggtg gttaccaggt taacccgtac 600
gttggcttcg aaatgggcta cgactggctg ggccgcatgc cgtataaagg cgacactgta 660
aacggcgctt tcaaagctca gggcgtacag ctgaccgcta aactgggtta cccggtaacc 720
gacgatctgg acgtttacac ccgtctgggc ggcatggtat ggcgtgctga ttcctcttct 780
aacatcgctg gcgacgacca cgacaccggc gtttctcctg tattcgcagg cggcgttgag 840
tgggcaatga ctcgcgacat cgctacccgt ctggaatacc agtgggttaa caacatcggc 900
gacgcacaga ctgttggcgc gcgtccggac aacggcatgc tgagcgtagg tgtttcctac 960
cgtttcggtc agcaggaaga tgcagctccg gttgtagctc cggctccggc tccggctccg1020
gaagtacaga ccaagcactt caccctgaag tctgacgttc tgttcaactt caacaaagct1080
accctgaaac cggaaggcca gcaggcgctg gatcagctgt actctcagct gagcaacctg1140
gatccgaaag acggttctgt agtggttctg ggcttcaccg accgtatcgg ttctgacgct1200
tacaaccagg gtctgtctga gaaacgtgct cagtctgttg ttgactacct gatctccaaa1260
ggtatcccgt ccaacaagat ctccgcacgt ggtatgggcg aatccaaccc ggtcactggc1320
aacacctgtg acaacgtgaa agctcgtgca gctctgatcg actgcctggg tccggatcgt1380
cgcgtagaga tcgaagttaa aggcgttaaa gacgttgtaa ctcagccgca ggcttaagtt1440
atacgttaag aaaaaccccg cccaggcggg gttttttgtt tctggcgttc atgtttctgc1500
cggaataagt tcagagactg gctttgcgcc tgtcatcaac gtctgttgtg ttttcggaag1560
ggtttatcat caccgcaggc atcacatttt gccctgcaat cgctgcgcta tgctccgggc1620
aagcgtgtca gcctgacgtt ttgcggcgcc tcgcccgcgt tactctttct tacccagcag1680
tgcctgcaaa tcctgtttca gcgtcgacat atgattttca tacttctctt tacgctcggc1740
atcttcaatc agctgcacga tggtttctga aagcgtaatc ccgcgacgct gcgcaagccc1800
ggccagtcgc tgccagacca taaactccag atcgatagac tttttacggg tatgctgatg1860
ctcggcatta aaatgccgct tacgacgggc gcgaatcgtc tgtttaaggc ggttttgcag1920
cgccgggttc atatgcttct cgatccagcc cagcactctt accggttcgt tttccatacc1980
cagcaagaga tccaccgcct ctttcgctgc gctggcttcg acatagcggg ttatcagctc2040
gccttcg2047
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