[发明专利]一种腺病毒-壳聚糖纳米复合材料的制备方法

权利要求书

1.一种腺病毒-壳聚糖纳米复合材料的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)聚乙二醇-叶酸缩合物的合成：将叶酸、二环己基碳二亚胺、N-羟基丁二酰亚胺按照1∶1∶1～1∶5∶5的摩尔比溶于二甲基亚砜，在氮气保护下活化6～48小时，过滤后得到活化的叶酸溶液，然后按照叶酸与聚乙二醇的摩尔比为20∶1～1∶2的比例加入重均分子量为2000～10000的聚乙二醇，在氮气保护下反应1～24小时，加入丙酮沉淀后离心除去多余叶酸，上清液用去离子水透析后冻干即得到聚乙二醇-叶酸缩合物；

(2)壳聚糖-聚乙二醇缩合物、壳聚糖-叶酸缩合物以及壳聚糖-聚乙二醇-叶酸的合成：将低分子量的壳聚糖溶于蒸馏水，配制成质量百分浓度为0.1％～10％的壳聚糖溶液，搅拌过夜；然后在常温下分别按摩尔比为1∶1∶1～5∶5∶1加入聚乙二醇、二氯乙烷以及N-羟基丁二酰亚胺，按摩尔比为1∶1∶1～5∶5∶1加入叶酸、二氯乙烷以及N-羟基丁二酰亚胺，按摩尔比为1∶1∶1～5∶5∶1加入聚乙二醇-叶酸缩合物、二氯乙烷以及N-羟基丁二酰亚胺，搅拌过夜，反应液分别用去离子水透析，冻干后得到壳聚糖-聚乙二醇缩合物、壳聚糖-叶酸缩合物以及壳聚糖-聚乙二醇-叶酸缩合物，其中，壳聚糖与聚乙二醇的摩尔比为1∶5～5∶1，壳聚糖与叶酸的摩尔比为1∶5～5∶1；

(3)腺病毒-壳聚糖纳米复合物的制备：将低分子量壳聚糖、壳聚糖-聚乙二醇缩合物、壳聚糖-叶酸缩合物以及壳聚糖-聚乙二醇-叶酸缩合物分别在常温下溶解于磷酸盐缓冲液中，制成质量百分浓度为1％的溶液；将所述溶液分别与60μl浓度为1×10¹²VP/ml的腺病毒混悬液混合，得到腺病毒/壳聚糖混合液、腺病毒/壳聚糖-聚乙二醇混合液、腺病毒/壳聚糖-叶酸混合液、腺病毒/壳聚糖-聚乙二醇-叶酸混合液，将上述混合液按照体积比为1∶1∶1∶1～2∶3∶2∶3的比例再次全部混合后进行静电纺丝，其中，所述静电纺丝的参数如下：电压为10～20KV、溶液流速为2～10mL/h、针尖到磷酸三甲苯脂接收池的接收距离为5～15cm，接收后缓慢搅动10～30min，再进行离心浓缩除去未反应的物质，得到腺病毒-壳聚糖纳米复合材料，于4℃下储存。