[发明专利]以南瓜藤蔓为原料联合制取多糖和黄酮的方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种以南瓜藤蔓为原料联合制取多糖和黄酮的新方法、新工艺。

背景技术：

糖尿病(Diabetes mellites，简称DM)是一种较为常见的内分泌代谢障碍性疾病，研究表明，胰岛β细胞凋亡在糖尿病的发生发展中起着非常重要的作用。I型糖尿病是一种T细胞介导的自身免疫性疾病，以胰岛β细胞选择性破坏为特征。而在II型糖尿病动物模型人胰岛淀粉样多肽转基因鼠及Zucker糖尿病肥胖(ZDF)鼠体内，亦发现存在β细胞凋亡。因此，保护受损的胰岛β细胞，减少胰岛β细胞的凋亡是治疗糖尿病的一个重要途径。近年来研究发现多种植物及天然药物在保护胰岛β细胞方面发挥着重要的作用。南瓜多糖(pumpkin polysaccharide，PP)是天然植物南瓜中提取的有效成分，已发现具有降低血糖作用，然而降血糖机制还不清楚。

现有提取南瓜多糖的工艺：

1)中国专利申请号200310111322.5采用破碎、磨汁、过滤后，用微滤膜、不同分子量的膜、及反渗透浓缩膜分离出南瓜多糖，冷冻干燥得到南瓜多糖，该方法成本高，蛋白含量高，杂质多；

2)中国专利申请号200310116848.2将南瓜粉用热水抽提，所得滤液用乙醇沉淀，将所得沉淀物洗涤，加入三氯醋酸，冰箱中放置过夜，离心，滤液逆水透析后干燥，得多糖产物，该方法简单，但成色较差，产品品质不好，杂质较多；

3)中国专利申请号200710017285.X采用热水浸提获得南瓜水提液，有机溶剂沉淀，沉淀用水溶解，上清液浓缩，除蛋白，经乙醇分级沉淀得到南瓜多糖的三种组分50％乙醇沉淀物，70％乙醇沉淀物和80％乙醇沉淀物，该方法所得南瓜多糖纯度不高；

4)中国专利申请号200810302942.X经处理后加水提取0.5-3h，滤液离心，上清液过树脂柱进行柱层析，洗脱液浓缩后加入乙醇进行沉淀，沉淀物加三氯醋酸离心脱蛋白，上清液浓缩干燥得南瓜多糖，该方法所得多糖含量高，但从原料中仅提取一种产品，成本相对较高。

南瓜(Cucurbita moschata Duch.)系葫芦科南瓜属一年生蔓生草本植物。《本草纲目》中称其具有“补中、补肝气、益心气、益肺气、益精气”之功效。性温，味甘、无毒，入脾、胃二经，能润肺益气、化痰排脓、驱虫解毒，治疗咳嗽、哮喘、肺痈、便秘等症。近年来，国内外对南瓜化学成分、药理作用和临床应用进行了较多的研究，证明南瓜具有多种药理活性成分，是开发各种保健品和药品的宝贵资源。研究结果发现，中国南瓜营养成分为水分90.24％、蛋白质0.65％、脂肪0.13％、碳水化合物6.08％、纤维2.15％、灰分0.73％，同时还有丰富的胡萝卜素、维生素、氨基酸、矿物质及生物碱、南瓜子碱、胡芦巴碱等有益生理活性物质等。南瓜藤茎主要含有多糖和黄酮类化合物，黄酮具有多种药理作用，包括抗氧化作用、抗炎作用、抗癌和抗基因诱变作用。谢宗波等通过实验表明南瓜茎黄酮对猪油有较强的抗氧化活性。

南瓜在我国种植面广、品种多、资源极为丰富，是一种急待开发的理想天然保健品资源。但目前人们种植南瓜大部分取得南瓜子籽，果肉用于食品加工和食用，南瓜藤茎则被弃于田间，造成资源的大量浪费，且易污染环境。因此，利用我国丰富的南瓜资源，提高经济附加值，变废为宝，充分挖掘其新的利用价值和应用领域，具有重要的意义。

发明内容：

本发明要解决的技术问题是提供一种以南瓜藤蔓为原料联合制取多糖和黄酮的方法，该方法对南瓜藤蔓有效活性成分进行了充分提取，提高了南瓜的利用率，可获得良好的经济效益。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

以南瓜藤蔓为原料联合制取多糖和黄酮的方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)提取：将南瓜藤蔓粉碎，先加入5-20倍量热水微波提取，再用5-10倍量50-85％的乙醇溶液微波提取，趁热过滤，合并提取液；

(2)大孔树脂吸附分离：将提取液减压浓缩至原体积的1/3-1/5；浓缩液通过大孔树脂饱和吸附，依次用60％乙醇、85％乙醇洗脱，分别收集下注液和洗脱液；

(3)多糖纯化：将下注液采用酶法或TCA法去除蛋白，透析除去小分子成分，再用乙醇沉淀析出，冷冻干燥即得南瓜叶多糖；

(4)黄酮纯化：将洗脱液浓缩成浸膏，加碱溶解，超滤膜滤过，透过液加酸沉淀，热乙醇回流溶解结晶，干燥即得南瓜叶黄酮。

所述步骤(2)中大孔树脂可采用D4020、D103、HP20、HZ80中的一种。