[发明专利]重组金黄色葡萄球菌肠毒素M及应用

说明书

本申请是申请日为2007年3月30日，申请号为200710067890.8的中国专利申请的分案申请。

技术领域

本发明属生物工程，涉及一种重组金黄色葡萄球菌肠毒素M(Staphylococcal Enterotoxin M，SEM)的制备以及在制备用于刺激淋巴细胞增殖、抑制肿瘤细胞生长的药物中的用途。

背景技术

1989年，超抗原的概念由瑞典科学家White提出，它是一类由细菌、病毒、寄生虫产生的对淋巴细胞有强大刺激功能的蛋白质，由于其对T淋巴细胞的激活能力是普通抗原的2000-50000倍，故称为超抗原。金黄色葡萄球菌肠毒素(Staphylococcal Enterotoxin，SE)是目前全世界范围内广泛研究的一种超抗原。其中研究最为深入的主要包括A型金黄色葡萄球菌肠毒素(StaphylococcalEnterotoxin A，SEA)、B型金黄色葡萄球菌肠毒素(Staphylococcal EnterotoxinB，SEB)、C2型金黄色葡萄球菌肠毒素(Staphylococcal Enterotoxin C2，SEC2)等。

与普通抗原不同，肠毒素超抗原首先以完整分子结合于抗原提呈细胞(APC)表面的II类主要组织相容性复合体(MHC)的抗原结合沟槽外侧，而后与T细胞表面的抗原受体分子(TCR)的Vβ区结合，形成SE-MHC-TCR三分子复合物后大量激活T细胞。由此激活的T细胞可直接杀伤表达MHC-II类分子的肿瘤细胞，而对不表达MHC-II类分子的肿瘤细胞也可产生间接的杀伤效应。同时，被SE激活的CD4⁺T细胞可分泌大量细胞因子，如IL-2、IFN-γ、TNF-α等，对肿瘤细胞有强烈的杀伤作用。IL-2等因子亦可激活NK细胞，使其发挥自然杀伤作用，IFN-γ、TNF-α等细胞因子还可促进肿瘤细胞的MHC-II类分子的表达，增强T细胞的识别。因此，经SE激活的T细胞能对肿瘤细胞和肿瘤组织产生高效的直接或者间接的杀伤作用。如Perabo等人证实经SEB刺激的外周血单核细胞(PBMC)能高效诱导人膀胱癌细胞株RT112细胞和RT4细胞调亡。Hedlund等人进行的体内实验表明，SEA激活T细胞使之增殖作用在每只小鼠0.1-100μg范围内呈剂量依赖关系，注射后1天出现最大效应，增殖效应维持4天。为提高在肿瘤治疗中的靶向性和特异性，人们针对不同肿瘤细胞表面特异性抗原，制备了多种相关抗原的单抗-超抗原融合蛋白或将单抗与超抗原偶联，大大增强了所激活的T细胞对肿瘤细胞和肿瘤组织的靶向性，使其能特异地杀伤肿瘤细胞，抑制肿瘤生长。此外，人们还利用肿瘤细胞表面过度表达的受体的配体制备了配体-超抗原融合蛋白，有效地提高了由此激活的T细胞对肿瘤组织的靶向性。另外，将超抗原基因转染肿瘤细胞，将超抗原修饰的肿瘤细胞作为瘤苗继而免疫动物，亦获得了令人满意的抵抗肿瘤细胞再次攻击的效果。

在我国，以金黄色葡萄球菌肠毒素C(SEC)为主要有效成分的金黄色葡萄球菌滤液制剂作为肿瘤防化疗治疗的辅助药物应用于临床已有近十个年头，大量的临床数据证明使用后肿瘤患者的免疫能力获得了显著的提高，患者的食欲、睡眠以及全身状况均得到了明显好转。如罗锋等对35例浅表转移性肿瘤应用金葡菌滤液制剂进行局部治疗，治疗一个月后总有效率达82.9％。汤炜等通过对早期口腔癌采用局部金葡菌滤液制剂治疗及对晚期口腔癌应用金葡菌滤液制剂联合化疗，发现其可使大量淋巴细胞及纤维组织聚集在癌巢附近，并能观察到肿瘤细胞显著减少甚至部分病例肿瘤细胞消失。吴洁等将金葡菌滤液制剂作为化疗的辅助药物应用于食管癌治疗，结果显示与对照组相比，可明显升高白细胞，减轻胃肠道反应。