[发明专利]新型抗乳腺癌多肽疫苗

权利要求书

1.一种新型抗乳腺癌E75多肽疫苗，其特征在于包括一个来源于HER2/neu(表皮生长因子受体)的E75多肽片段，一个效应T细胞(Th，T辅助细胞)抗原决定基，一个TLR(toll-likereceptor，toll样细胞受体)的配基，和连接这三组分的半胱氨酸，该疫苗的研制方法为：①以半胱氨酸为底物，通过高氯酸的氧化作用形成二聚化的半胱氨酸，加入乙酸叔丁酯与氨基酸的羧基酯化，加入棕榈酰氯，在氨基处形成酰化反应，还原二硫键并加入环氧丙醇，在巯基处形成开环氧的氧化反应，再加入棕榈酰氯，在两个羟基处发生酰化反应，去掉最初半胱氨酸上的保护基，便制出Pam₃Cys化合物；②氯甲基聚苯乙烯树脂作为不溶性的固相载体，首先将一个氨基被封闭基团Fmoc-保护的氨基酸共价连接在固相载体上，20％pipe的作用下，脱掉氨基的保护基，这样第一个氨基酸就接到了固相载体上了，DIEA提供一个碱性的反应环境，HBTu作为缩合剂，将第二个氨基酸再与已接在固相载体的第一个氨基酸的氨基反应形成肽键，这样在固相载体上就生成了一个带有保护基的二肽，重复上述肽键形成反应，使肽链从C端向N端生长，直至达到所需要的肽链长度，脱去保护基Fmoc-，水解肽链和固相载体之间的酯键，就得到了合成好的肽；③最后，将Pam₃Cys上的羧基和E75多肽上的氨基通过缩合反应连接。

2.根据权利要求1所述的三组分疫苗的制备方法，其特征在于：半胱氨酸与高氯酸的物质的量比为1∶5。

3.根据权利要求1所述的三组分疫苗的制备方法，其特征在于：加入含4倍当量的碳酸氢钠的水溶液，加入2倍当量的棕榈酰氯。

4.根据权利要求1所述的三组分疫苗的制备方法，其特征在于：用锌粉还原二硫键是，逐渐滴加甲醇/盐酸(37％)/浓硫酸混合溶液(体积比100∶7∶1)作为活化剂，然后加入2倍当量的环氧丙醇。

5.根据权利要求1所述的三组分疫苗的制备方法，其特征在于：加入3倍当量的三乙胺和少量DMAP(4-二甲氨基吡啶)作催化剂，边摇动边滴加2倍当量的棕榈酰氯。

6.根据权利要求1所述的三组分疫苗的制备方法，其特征在于：Pam₃Cys连接肽段时，加入TBTU(O-苯并三氮唑-N，N，N′，N′-四甲基脲四氟硼酸酯)、HOBT(1-羟基-苯并三氮唑)、N-甲基吗啉、DMF(二甲基甲酰胺)、DCM(二氯甲烷)，且DMF∶DCM＝5∶2。