[发明专利]一种培养间充质干细胞的培养基无效
申请号: | 201010564874.1 | 申请日: | 2010-11-24 |
公开(公告)号: | CN101984048A | 公开(公告)日: | 2011-03-09 |
发明(设计)人: | 郭子宽;吕君;吴祖泽;王立生;靳继德;常菁 | 申请(专利权)人: | 中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所 |
主分类号: | C12N5/0775 | 分类号: | C12N5/0775 |
代理公司: | 北京尚诚知识产权代理有限公司 11322 | 代理人: | 鲁兵 |
地址: | 100850*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 培养 间充质 干细胞 培养基 | ||
1.一种培养间充质干细胞的培养基,该培养基组成包括:(1)经过改良的基础培养基IMDM;(2)细胞生长因子组合;(3)胰岛素;(4)微量元素;(5)脂类物质;(6)维生素类物质;(7)激素类物质;(8)蛋白质分子;(9)氨基酸类物质;和(10)其它化合物。
2.根据权利要求1所述的培养基,其特征在于:所述(1)经过改良的基础培养基IMDM,是在商售IMDM基础上,添加至少包括生物素(5-50μM,优选5-30μM)和谷氨酰胺(5-10μM,优选5-7.5μM)在内的水溶性化合物;所述水溶性化合物还可包括氯化铁(50-1000ng/mL)、氯化铬(0.1-10μg/L)、氯化铜(0.1-1mg/L)、氯化锰0.01-0.1mg/L、氯化锌0.1-10μg/L以及钼酸钠(100-1000ng/mL)等一种或多种。
3.根据权利要求1或2所述的培养基,其特征在于:所述(2)细胞生长因子组合至少包括碱性成纤维细胞生长因子(bFGF,1-100ng/mL,优选5-50ng/ml)和表皮生长因子(EGF,1-150ng/mL,优选25-100ng/ml),还可包括激活素A(activin A,1-100ng/ml,优选5-50ng/ml)、转化生长因子-β(TGF-β,1-100ng/mL,优选5-50ng/ml)、骨形成蛋白(BMP,1-100ng/mL,优选5-50ng/ml)、白血病抑制因子(LIF,1-100ng/mL,优选5-50ng/ml)、干细胞生长因子(SCF,1-100ng/mL,优选50-10ng/ml)、肝细胞生长因子(HGF,1-100ng/mL,优选10-50ng/ml)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1,1-150ng/mL,优选25-100ng/ml)、促红细胞生成素(EPO,0.1-50U/mL,优选0.5-5U/ml)、血清素(1-100nM/L,优选5-50nM/l)、血小板源生长因子BB(PDGF-BB,1-150ng/mL,10-50ng/ml)、白介素-6(IL-6,1-100ng/mL,优选5-50ng/ml)等其中一种或多种。
4.根据权利要求1或2或3所述的培养基,其特征在于:所述(3)胰岛素添加量为1-100μg/mL(优选2.5-20μg/ml),可为临床级用药或重组蛋白;所述(4)微量元素至少包括硒(10-100nM,优选30nM),以亚硒酸钠或其它化合物形式提供;所述(7)激素类物质可为地塞米松(低于10-9M)或氢化考的松(低于5μg/mL)。
5.根据前述权利要求1至4之一所述的培养基,其特征在于:所述(5)脂类物质可为胆固醇(10-100μg/mL),还可为亚油酸(1-50mg/L)、亚麻酸(1-50μg/mL)、中链甘油三酯(1-500μg/mL)、卵磷脂(0.1-20μg/mL)和注射用大豆油(1-500μg/mL)等其中一种或多种。
6.根据前述权利要求1至5之一所述的培养基,其特征在于:所述(6)维生素类物质(6)所述维生素类物质包括脂溶性和水溶性维生素两种中至少一种,包括维生素B组如Vit-B5(1-100μM)、维生素A(1-200μM)、维生素C(50μg/mL)、维生素E(10-100μg/mL)等其中的一种或多种。
7.根据前述权利要求1至6之一所述的培养基,其特征在于:所述(8)蛋白质分子主要为注射用人白蛋白,添加量为1-50mg/mL(优选2-20mg/ml),也可包括其它分子,如转铁蛋白(10-100μg/ml,优选20-50μg/ml)、乙酰辅酶A(0.1-10U/mL,优选1-5U/ml)、辅酶I(10-1000ng/ml,优选25-200ng/ml)等。
8.根据前述权利要求1至7之一所述的培养基,其特征在于:所述(9)氨基酸类物质指多种氨基酸复合物,包括L-脯氨酸、L-丝氨酸、L-丙氨酸、L-异亮氨酸、L-门冬氨酸、L-酪氨酸、L-谷氨酸、L-苯丙氨酸、精氨酸、赖氨酸、缬氨酸、苏氨酸、组氨酸、甲硫氨酸、胱氨酸和甘氨酸等中的一种或多种,添加量为1-100μM。
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