[发明专利]虎纹捕鸟蛛毒素-XVI

说明书

技术领域

本发明涉及一种虎纹捕鸟蛛毒素。

背景技术

 痛觉是一种与组织损伤或潜在的损伤相关的不愉快的情感体验和主观感觉，它是感觉神经系统的功能，是机体自我保护的一种反射机制。多肽类钙通道抑制剂广泛存在于蜘蛛、芋螺和蝎子等有毒动物的毒液中，具有开发成治疗人类疾病的镇痛新药的应用前景。例如，ω-芋螺毒素MVIIA是研究比较清楚的脊椎动物神经元N-型钙通道阻断剂，通过堵塞其受体孔道而达到目的。ziconotide（合成的ω-芋螺毒素MVIIA）作为一种治疗严重慢性疼痛的新型非阿片类新药已于2004年被美国食品和药物管理局获准出售。因此，全世界都将精力转移到开发不以阿片类受体为靶点的强效镇痛药。

发明内容

本发明旨在于提供一种能明显抑制哺乳动物N-型钙通道的虎纹捕鸟蛛毒素-XVI。

本发明虎纹捕鸟蛛毒素-XVI，是从虎纹捕鸟蛛粗毒中经离子交换和反相高效液相色谱分离提纯得到的，其多肽的氨基酸序列如下：Cys Ile Gly Glu Gly Val Pro Cys Asp Glu Asn Asp Pro Arg Cys Cys Ser Gly Leu Val Cys Leu Lys Pro Thr Leu His Gly Ile Trp Tyr Lys Ser Tyr Tyr Cys Tyr Lys Lys。

本发明提供的这种虎纹捕鸟蛛毒素-XVI（HWTX-XVI）其一级结构由39个氨基酸残基组成，其中含6个半胱氨酸并形成三对二硫键，分子量为4437.4 Da，该毒素纯化冻干粉的理化性状为白色或类白色疏松体，无气味，极易溶解于水，水溶液近于无色透明；对大鼠背根神经元N-型钙通道的半数最大抑制浓度为60 nmol/L，它是一种很强的选择性作用于N-型钙通道的抑制剂，具有低毒性和可逆性，能有效抑制哺乳动物N-型钙通道，有希望成为开发治疗N－型钙通道相关疾病的先导分子。

附图说明

图1是虎纹捕鸟蛛粗毒阳离子交换HPLC图谱。箭头表示目的峰，纵坐标表示洗脱峰在280 nm的吸收值，横坐标表示洗脱时间。

图2是虎纹捕鸟蛛粗毒目的阳离子交换峰反相HPLC图谱。“*”表示目的峰，纵坐标表示各个洗脱峰在280 nm下的吸收值，横坐标表示洗脱时间。

图3是HWTX-XVI的反相HPLC图谱。

图4是HWTX-XVI的MALDI-TOF质谱图谱。

图5是1 uM HWTX-XVI对大鼠输精管收缩的影响。1 uM HWTX-XVI能快速抑制低频率电刺激诱导的大鼠输精管收缩，而且这种抑制作用是可逆的。

图6是HWTX-XVI抑制大鼠输精管收缩的浓度依从性。浓效曲线均用Hill方程进行拟合得出IC₅₀。方程y=1-(1-f_max)/(1 + ([x] /IC₅₀)^nH)中，x代表毒素浓度，IC₅₀代表毒素半数有效抑制浓度，n_H是Hill常数。

图7是10 mM HWTX-XVI对低电压激活钙电流的影响。

图8是10 mM HWTX-XVI能明显抑制高电压激活钙电流。

图9是HWTX-XVI不能进一步阻断GVIA－不敏感的电流。

图10是在细胞外液中存在HWTX-XVI时，GVIA不能抑制电流。

图11是MVIIA可阻断部分HWTX-XVI不敏感钙电流。

图12是HWTX-XVI对钙通道电流-电压关系（I-V curve）的影响。

图13是HWTX-XVI抑制N-型钙通道的浓度依赖性。图中每个点的数据来自于5～8个实验细胞，用平均值±标准误（mean±S.E.）来表示。浓度曲线均用Hill方程进行拟合得出IC₅₀。方程y=1-(1-f_max)/(1 + ([x] /IC₅₀)^nH)中，x代表毒素浓度，IC₅₀代表毒素半数有效抑制浓度，n_H是Hill常数。

图14是HWTX-XVI抑制N-型钙通道的时间依从性。

具体实施方式

1、实验：

1.1虎纹捕鸟蛛粗毒的分离纯化：