[发明专利]一种枯草菌脂肽钠的制备方法

权利要求书

1.一种枯草菌脂肽钠的制备方法，包括：

步骤1：取保藏编号为CGMCC No.1107的枯草芽孢杆菌E8接种斜面培养基31～35℃培养48～72h，4℃保藏2～15d，所述斜面培养基配方为：牛肉膏2～8g/L、蛋白胨5～15g/L、氯化钠2～8g/L、琼脂粉10～25g/L；

步骤2：取斜面保藏菌落接种于种瓶培养基，31～35℃培养20～28h，所述种瓶培养基配方为：葡萄糖15～25g/L、L-谷氨酸2～10g/L、磷酸二氢钾0.5～2g/L、酵母提取物0.5～3g/L；

步骤3：取种瓶培养物接种于发酵培养基，31～37℃、150～350rmp培养24～72h，期间用1～3mol/L氢氧化钠溶液控制发酵液pH值大于6.8，所述发酵培养基配方为：葡萄糖或麦芽糖30～50g/L、可溶性淀粉或糊精30～50g/L、L-谷氨酸钠15～25g/L、磷酸二氢钾0.5～2g/L、酵母提取物0.5～3g/L。

2.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤2所述接种的接种量为每50mL种瓶培养基接种0.1～0.5cm²斜面保藏菌落。

3.根据权利要求1或2所述制备方法，其特征在于，步骤3所述种瓶培养物接种量为发酵培养基体积的1.0～1.9％。

4.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，还包括对步骤3所得发酵液进行分离纯化。

5.根据权利要求4所述制备方法，其特征在于，所述分离纯化包括：

步骤I：枯草菌脂肽钠发酵液预处理制备枯草菌脂肽钠粗提物；

步骤II：溶解枯草菌脂肽钠粗提物，过滤收集滤液；

步骤III：调节滤液pH值沉淀蛋白，收集上清液；

步骤IV：步骤III所得上清液加入沉淀剂，收集沉淀，所述沉淀剂为氯化钠、磷酸钠盐、脂肪氨盐酸盐、烷磺酸钠、烷基酚醛树脂-聚氧丙烯聚氧乙烯醚、聚甲基苯基硅油-聚氧丙烯聚氧乙烯醚或超高分子聚氧丙烯聚氧乙烯醚；

步骤V：步骤IV所得沉淀用1～3mol/L氢氧化钠溶液溶解，调pH值至6～7，结晶、干燥得枯草菌肽钠成品。

6.根据权利要求5所述制备方法，其特征在于，步骤I所述发酵液预处理为发酵液过滤除菌体，调节pH值至2～5，0～8℃静置12～20h以上，收集沉淀，干燥得枯草菌脂肽钠粗提物。

7.根据权利要求5所述制备方法，其特征在于，步骤II所述溶解枯草菌脂肽钠粗提物为加入溶解剂溶解，所述溶解剂为醇类、脂类或烷类，所述溶解剂加入量为每1g枯草菌脂肽钠粗提物加入溶解剂5～30mL。

8.根据权利要求5所述制备方法，其特征在于，步骤III所述调节滤液pH值沉淀蛋白为滤液先调节pH值至6.5～7.0，然后离心取滤液调节pH值至3.5～5.5，离心。

9.根据权利要求5所述制备方法，其特征在于，还包括层析纯化步骤。

10.根据权利要求9所述制备方法，其特征在于，所述层析纯化为用吸附树脂或离子交换树脂层析纯化。