[发明专利]同时制备parishin、parishin B、parishin C化学对照品的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种同时制备parishin、parishin B、parishin C化学对照品的制备新工艺。主要包括树脂柱分离及反相高效液相制备色谱两步高效纯化，合理收集流份即可同时获取三种对照品。其结构式如下： 

Parishin：R₁＝R₂＝R₃

Parishin B：R₁＝R₂＝R，R₃＝H 

Parishin C：R₁＝R₃＝R，R₂＝H 

背景技术

天麻(Gastrodia elata Bl.)是我国公布的34种名贵药材之一，主治头痛眩晕、肢体麻木、癫痫抽搐等症。天麻素为天麻活性成分，也是我国2005版国家药典中天麻药材的含量测定成分；而parishin、parishin B、parishin C为天麻素的柠檬酸取代物，其专属性及稳定性均优于天麻素(王莉等，中草药，2006，37(9)：1402-1405)，为天麻潜在质控成分。制备parishin类对照品对于天麻药材及相关复方的多指标质量控制具有重要意义。Yoe-ray Ku等先后尝试以高效液相色谱法和毛细管电泳法，以parishin、parishin B、parishin C为指标成分评价天麻药材及相关复方质量(Journal of Chromatography A，1998，805(1-2)：330-336；Journal ofLiquid Chromatography&Related Technologies，1996，19(20)：3265-3277)。 

目前，parishin类对照品市场上未见供应，其分离制备方法也少有报道。 

1)同时获取parishin、parishin B、parishin C三种对照品。 

Jer-huei Lin等(Phytochemistry，42(2)：549-551，1996)报道了parishin类成分的制备方法，其制备步骤有三步：天麻70％乙醇提取物经活性炭层析分为乙醇和氯仿系统部位；以上两部位合并后用水混悬用氯仿和乙酸乙酯萃取除杂；萃取水液上MCI柱得到3个目标化合物。该方法制备工艺较为复杂，制备周期较长。 

2)获取单个对照品。 

Xiao-dong Yang等报道天麻70％乙醇提取物经萃取、两次反相高效液相制备获得parishin B 20mg(Natural Product Research，21(2)：180-186)，其反相制备条件为甲醇-水梯度，制备规模较小。N.Li等报道天麻的80％乙醇提取物经萃取、sephadex LH-20柱、反相高效液相制备获得pari shin(Journal of Asian Natural Products Research，9(4)：373-377，2007)，其反相制备条件为乙醇-水梯度，规模化放大制备成本较高。 

本发明采用天麻粗提物为原料，通过树脂柱分离及反相高效液相制备色谱两步高效纯化，合理收集流份，可批量同时获取三个对照品。 

发明内容

本发明提供了一种工艺简单、易规模化的制备新方法，可以以天麻粗提物为原料，同时制备纯度大于98％的parishin、parishin B、parishin C三种化学对照品，其累计制备规模可达月产50g对照品。 

为实现上述目的，本发明采用的技术方案： 

天麻药材经提取得粗提物，或直接以天麻提取物为原料，经树脂柱分离及反相高效液相制备色谱两步高效纯化，同时获取纯度大于98％的parishin、parishin B、parishin C三种化学对照品； 

1)树脂柱粗分离： 

天麻药材用水和/或乙醇溶液提取得粗提物，或直接购买天麻提取物，用水或低浓度乙醇溶液溶解，树脂柱分离，先以水、10％乙醇溶液洗脱除去杂质，然后以体积分数在20％-30％之间的任一乙醇溶液洗脱，收集相应乙醇洗脱物，浓缩干燥得黄色粉末； 

2)反相高效液相制备色谱精制： 

黄色粉末用水或低浓度甲醇溶液溶解，微孔滤膜过滤，反相高效液相制备色谱分离，以甲醇-醋酸水溶液为洗脱体系，紫外检测器270nm监测，分别收集制备图谱中三个主要的色谱峰，相应流份干燥即可得到纯度大于98％的三个对照品，其外观为白色粉末。