[发明专利]高产甘氨酸菌株的筛选及其在腈类化合物转化中的应用

权利要求书

1.高产甘氨酸菌株的筛选及其在腈类化合物转化中的应用，其特征在于：采集生产腈类化合物的化工厂厂房周围的土壤样品，在甘氨腈为唯一氮源并添加溴百里香酚蓝的固体初筛培养基进行筛选，获得一株高产甘氨酸菌株尖孢镰孢H3(Fusarium oxysporum)。对该菌株进行培养，并以甘氨腈为底物进行甘氨酸转化。该菌株还可将其它腈类化合物转化为相应的酸。

2.根据权利要求1所述的高产甘氨酸菌株的筛选，其特征在于使用的筛选土样为腈类化合物的化工厂厂房周围的土壤样品。

3.根据权利要求1所述的高产甘氨酸菌株的筛选，其特征在于使用的固体初筛培养基是以甘氨腈为唯一氮源并添加了溴百里香酚蓝，其甘氨腈添加量为0.1g/L～2.0g/L、溴百里香酚蓝0.05～0.5g/L。

4.根据权利要求1所述的高产甘氨酸菌株的筛选，其特征在于使用的固体初筛培养基是以甘氨腈为唯一氮源并添加了溴百里香酚蓝，还包括了适量的葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、硫酸亚铁、氯化钙、氯化钠、琼脂。

5.根据权利要求1所述的高产甘氨酸菌株的筛选，其特征在于将权利要求2所述的土样制成土壤悬液，取适量悬液倾注于权利要求3所述的固体初筛培养基，混匀并培养3-5d，挑取产生蓝色变色圈的的单菌落，转接至新鲜的培养基划线分离，转接3-5代，获得纯培养菌株。

6.根据权利要求1所述的一株高产甘氨酸菌株，其特征在于该菌株为尖孢镰孢H3(Fusarium oxysporum)，现保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.3829.但权利要求1所述的高产甘氨酸菌株，不限于尖孢镰孢H3(Fusarium oxysporum)。

7.根据权利要求1所述的尖孢镰孢(Fusarium oxysporum H3)的培养，其特征在于：

(1)培养基：甘油10-20g/L，酵母膏1.0-10g/L，蛋白胨1.0-10g/L，硫酸镁0.1-0.5g/L，磷酸二氢钾1.0-5.0g/L，氯化钠0.5-1.0g/L，硫酸亚铁0.01-0.1g/L，己内酰胺0.5-1.0g/L，pH 5.0-8.0；

(2)培养温度25-45℃，培养时间2-6d。

8.根据权利要求1所述的以甘氨腈为底物进行甘氨酸转化的方法，其特征在于：

(1)底物溶液：配制5-100g/L的甘氨腈溶液，用0.5-5.0M的氢氧化钠或盐酸溶液调节pH至5.0-9.0；

(2)菌体收集：根据权利要求7所述的培养基和培养方法进行菌体培养，以6000-15000rpm离心5-20min，以收集经培养得到的菌体，用0.01-0.5M，pH 6.0-8.0的磷酸缓冲液洗涤菌体2-4次。

(3)转化：将菌体重新悬浮于上述缓冲液中，并与底物溶液混匀，反应pH保持在6.0-8.0，反应温度保持在20-60℃，搅拌转速为50-250rpm，反应时间6-48h。

9.根据权利要求1所述的尖孢镰孢(Fusarium oxysporum H3)还可将其它腈类化合物转化为相应的羧酸。