[发明专利]用于鱼翅PCR-RFLP鲨鱼种类鉴别的引物、试剂盒和方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体而言，本发明涉及用于不同种属鲨鱼鱼翅区分的寡核苷酸引物、试剂盒、聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(polymerase chain reaction and restriction fragment length polymorphism analysis，PCR-RFLP)检测方法，以及所述寡核苷酸引物在鉴别不同种属鲨鱼鱼翅中的应用。

背景技术

鱼翅，海产烹饪原料，又称鲛鲨翅、沙鱼翅、金丝菜，是一种由软骨鱼系鲨鱼或犁头鳐的鳍经加工而制成的产品，主要以鳍中的软骨(又称翅筋、翅针)供食，包括背鳍、胸鳍、腹鳍、臀鳍、背鳍、尾鳍。

鱼翅种类甚多，南北名称很不一致，尚无一个统一的分类。通常的分类方法有三种：一、按鱼鳍部位分类；二、按加工与否和加工品的形状分类；三、按鲨鱼的品种分类。下面主要介绍按鲨鱼的品种分类：

(1)披刀翅、青翅、勾尾翅、勾尖翅：用日本翅鲨、黑印真鲨、沙拉真鲨、扩口真鲨和大青鲨的鳍制成，如大青鲨、澳洲半沙条鲨；

(2)象耳白翅：以三铎锥齿鲨的鳍制成，如尖吻斜锯牙鲨、加勒比斜锯牙鲨；

(3)猛鲨翅、猛鲨青翅、猛鲨尾翅：以老鼠鲨、蒙鲨、昂鲨的鳍制成，如尖吻鲭鲨；

(4)脊披刀翅、反白青翅、脊勾尾翅：以双髻鲨的鳍制成，如路氏双髻鲨；等等。

由于我国相关食品法规的不完善和检测手段的相对落后，如何规范市场秩序，打击掺杂掺假以及以次充好的商业欺诈行为，为消费者提供良好的食品安全保障手段，是当前众多学者研究的热点与难点。目前鱼翅产品缺乏相关标准、规范，执法困难，许多不法企业趁机谋取暴利。截止现在，未见有成熟的鱼翅真伪鉴别的方法。当前主要依靠个人经验，通过眼看、手摸、口尝等感官方法进行鱼翅的真伪鉴别，使检测结果的准确性及精确性大打折扣。PCR-RFLP技术作为一种分子生物学技术，从基因水平分析食品的真伪，不受环境、取材部位、时间等因素的影响，而且信息量大，可以用来区分形态标记难以鉴别的细微差异，准确、快速。PCR-RFLP技术在鱼翅制品中鲨鱼种类的鉴别尚未有过报道。

目前，国内外少见报道能快速、简单、特异且灵敏地检测不同种属鲨鱼鱼翅的方法。

因此，本领域需要一种快速、特异性好、灵敏度高的不同种属鲨鱼鱼翅的检测方法。

发明内容

本发明的一个目的在于，提供用于快速鉴别不同种属鲨鱼鱼翅的寡核苷酸引物。

本发明的另一个目的在于，提供快速鉴别不同种属鲨鱼鱼翅的PCR-RFLP检测方法。

本发明的再一个目的在于，提供用于快速鉴别不同种属鲨鱼鱼翅的试剂盒。

本发明的还一个目的在于，提供本发明所述寡核苷酸引物在鉴别不同种属鲨鱼鱼翅中的应用。

针对上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

根据本发明的一个实施方案，本发明提供用于PCR-RFLP方法鉴别不同种属鲨鱼鱼翅的寡核苷酸引物对。本发明的寡核苷酸引物对是根据鲨鱼纲和硬骨鱼类的线粒体16s rDNA序列设计的，所述引物对能够特异性地鉴别不同种属鲨鱼鱼翅。在一个实施方案中，所述引物对由第一对引物和第二对引物组成，其中所述第一对引物为SK-F11：CTCAGCCATCTTACCTGTGGCAAT(SEQ ID No.1)和SK-R11：CYCCTCCTGCTGGGTCAAAG(SEQ ID No.2)，所述第二对引物为：Sharkfin-F2：CTACAAACCACAAAGATATCGGCACC(SEQ ID No.3)和Sharkfin-R2：CTCCTCCTGCTGGGTCAAAGAATGTTG(SEQ ID No.4)。所述第一对引物SEQ ID No.1和SEQ ID No.2和第二对引物SEQ ID No.3和SEQ ID No.4的组合是发明人经多次设计、比较，并经实验测定筛选到的，该组合的引物对能够特异性地区分多种不同种属的鲨鱼。在一个优选的实施方案中，本发明的寡核苷酸引物对能够区别不同种属鲨鱼的鱼翅，例如区别大青鲨、尖吻斜锯牙鲨、澳洲半沙条鲨、路氏双髻鲨、加勒比斜锯牙鲨、尖吻鲭鲨等鱼翅。