[发明专利]微生物转化制备R-4-氯-3-羟基丁酸酯和S-3-羟基丁内酯及菌株

权利要求书

1.巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)WZ009，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国，武汉，武汉大学，430072，保藏编号：CCTCCNO：M 2010171，保藏日期：2010年7月8日。

2.如权利要求1所述的巨大芽孢杆菌WZ009在微生物转化制备R-4-氯-3-羟基丁酸酯和S-3-羟基丁内酯中的应用。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述应用为：以式(I)所示的外消旋4-氯-3-羟基丁酸酯为底物，以巨大芽孢杆菌WZ009含酶菌体细胞为催化剂，在pH6.5～7.5反应体系中，于20～50℃下反应1～24h，反应结束后反应液经分离纯化得到式(II)所示的R-4-氯-3-羟基丁酸酯和S-3-羟基丁内酯；

式(I)、(II)中，R为C1～C4的烷基。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述反应在pH6.5～7.5的磷酸盐缓冲液中进行。

5.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述反应在水/正己烷两相反应体系中进行，水和正己烷体积比为1∶1。

6.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述反应以蒸馏水为反应溶剂，反应过程中用0.01M～0.2M氢氧化钠或氨水滴定调控反应体系保持为pH7.0±0.2。

7.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述底物为外消旋4-氯-3-羟基丁酸甲酯或外消旋4-氯-3-羟基丁酸乙酯。

8.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述反应体系中：底物初始浓度为10～200mmol/L，催化剂为巨大芽孢杆菌WZ009冻干菌粉、添加量为10～100g/L。

9.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述反应在25～35℃、摇床转速100～200r/min下进行，反应时间10～24h。

10.如权利要求3所述的应用，其特征在于：所述底物为外消旋4-氯-3-羟基丁酸乙酯，所述分离纯化方法如下：反应结束后，离心去除菌体，取上清液用等体积乙酸乙酯萃取分离，得到含有R-4-氯-3-羟基丁酸乙酯和S-3-羟基丁内酯的有机相，无水硫酸钠干燥，过滤后取滤液进行减压蒸馏，先除去溶剂，收集90～100℃(5mmHg)馏分得到R-4-氯-3-羟基丁酸乙酯，收集130～140℃(5mmHg)馏分得到S-3-羟基丁内酯。