[发明专利]一种脂肪干细胞的分离培养方法

权利要求书

1.一种脂肪干细胞的分离培养方法，包括从脂肪组织中分离获取、培养SVF细胞，其特征在于还包括以下步骤：用免疫磁珠分选法除去SVF细胞中的Lin⁺细胞，获得 Lin^-细胞群；用流式细胞分选法从获得的Lin^-细胞群中富集CD271⁺Sca-1⁺细胞，得到脂肪干细胞；将获得的脂肪干细胞用含有LIF、FGF2的培养基培养。

2.根据权利要求1所述的脂肪干细胞的分离培养方法，其特征在于：免疫磁珠分选法中所采用的标记物为CD5、CD45R、CD11b、Anti-Gr-1及Ter-119。

3.根据权利要求1所述的脂肪干细胞的分离培养方法，其特征在于：流式细胞分选法中使用的标记物为Lin、CD271和Sca-1。

4.根据权利要求1所述的脂肪干细胞的分离培养方法，其特征在于：培养获得的脂肪干细胞所用的培养基是含有10%体积比胎牛血清、10³-10⁵ U/mL LIF、10-100 ng/mL FGF2的α-MEM培养基。

5.根据权利要求4所述的脂肪干细胞的分离培养方法，其特征在于：培养获得的脂肪干细胞所用的培养基是含有10%体积比胎牛血清、10³ U/mL LIF、20 ng/mL FGF2的α-MEM培养基。

6.根据权利要求1所述的脂肪干细胞的分离培养方法，其特征在于：还包括对获得的脂肪干细胞进行传代培养。

7.根据权利要求6所述的脂肪干细胞的分离培养方法，其特征在于：所述的传代培养是贴壁培养。

8.根据权利要求7所述的脂肪干细胞的分离培养方法，其特征在于：当获得的脂肪干细胞在培养皿底部的生长密度达70-90%时，进行传代培养。

9.根据权利要求1-8任意一项脂肪干细胞的分离培养方法所分离培养的脂肪干细胞的应用，其特征在于其应用于纯化或克隆干细胞、转基因干细胞系的生产或者用于生产成脂/成骨细胞。

10.根据权利要求9所述的脂肪干细胞的应用，其特征在于其应用于生产成脂/成骨细胞的方法为：

（1）、荧光激活流式细胞分类和磁激活细胞分选相结合分离获取ASCs；

（2）、将ASCs分别复合纤维蛋白和BCP支架材料，接种于裸鼠背部或小鼠股骨缺损处。