[发明专利]克服B细胞免疫耐受的免疫微球及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及免疫领域，特别涉及一种克服B细胞免疫耐受的免疫微球及其应用。

背景技术

抗原(Ag)是指能与T、B淋巴细胞的TCR或BCR结合，促使其增殖、分化，产生抗体或致敏淋巴细胞，进而发挥免疫效应的物质。抗原的分类方法很多，根据诱生抗体时需否Th细胞参与，可分为胸腺依赖性抗原(TD-Ag)和胸腺非依赖性抗原(TI-Ag)。绝大多数蛋白质抗原，如病原微生物、血细胞、血清蛋白等均属TD-Ag。胸腺依赖性抗原诱导的抗体产生过程需要T细胞的参与。抗体产生的指令来自两种信号：抗原与B细胞表面抗原受体结合和辅助性T淋巴细胞(Th)的辅助刺激信号。

抗原蛋白表位与B细胞膜受体结合并发生内化，是第一信号。B细胞吞噬免疫微球后在B细胞内体(endosome)或溶酶体(lysome)中释放抗原并被蛋白酶水解，其中合适的片断与细胞MHCII结合提呈给Th细胞。实现Th细胞活化并释放细胞因子作为第二信号促使B细胞转化成分泌抗体的浆细胞。

接种疫苗是人类抵御和控制传染性疾病的有效手段之一。传统意义上的疫苗主要是预防性疫苗，其应用对象是健康群体的易感动物及人群，其疫苗成分一般均为微生物保护性抗原，可在健康肌体中激活特异性免疫应答，产生特异性抗体和细胞毒T淋巴细胞(CTL)，从而获得对该病原体的免疫预防能力，但对已发病的个体不能产生有效的免疫应答。

治疗性疫苗(Therapeutic Vaccine)是近年建立和发展起来的免疫治疗新概念，是指能够打破慢性感染者体内免疫耐受，重建或增强免疫应答的疫苗。治疗性疫苗能在已患病个体诱导特异性免疫应答，消除病原体或异常细胞，使疾病得以治疗，是抗病毒、抗肿瘤的新治疗手段。

肿瘤是治疗疫苗重点研究领域。用于制备疫苗的抗原有生长因子(EGF、TGF、VEGF)及相应受体(EGFR、Her2、VEGFR)肿瘤相关抗原CEA、MUC1等用于实体肿瘤治疗。CD20用于B细胞淋巴病的疫苗。Idiotype是另一类用于B细胞和T细胞淋巴细胞白血病。

默克制药公司目前正对一种用于非小细胞肺癌(最常见的肺癌种类)治疗的疫苗进行第三期临床试验，试验计划于2010年结束。该疫苗被设计用于诱发癌细胞表面的MUC1分子产生一种免疫反应。1300名参与此项试验的患者遍布全球，其中包括巴西、中国、印度和墨西哥这些发展中国家。这一大范围的受试者征集反映肺癌是一个全球性的问题。全球首个癌症治疗性EGF疫苗在古巴获准上市用于肺癌治疗。

瑞士医药集团塞托斯生物技术公司和英国Protherics公司两家都在对高血压疫苗进行二期临床试验。是以血管紧张素为疫苗，产生封闭抗体。

法国Neovacs公司Zagury等将人肿瘤坏死因子连接一种免疫促进剂——钥孔虫戚血蓝蛋白(KLH)。用此复合物免疫接种转基因小鼠，可完全保护小鼠免于重复注射肿瘤坏死因子的伤害，用于类风湿疾病治疗。拟用以代替昂贵的单克隆抗体和受体治疗用途。针对IgE的疫苗用于过敏性疾病、可能突现技术突破。TGF用于肝硬化及动脉高压研究。治疗性疫苗极有可能复制甚至超越单克隆抗体过去10年的辉煌。

以上的疫苗均以人体内自身蛋白为抗原，产生抗体为目标，通过中和反应封闭特定分子的功能，或通过抗体的ADCC效应和补体杀伤效应实现治疗目的

由上可知，目前的治疗性疫苗所采用的抗原通常选用人体或者动物的自身蛋白，或称内源性蛋白。

内源性蛋白不能诱导动物或人产生高滴度抗体。称之谓B细胞免疫耐受。

实际上但是针对自身蛋白反应的B细胞还是会少量产生。在二级淋巴细胞组织中因体细胞突变机制使B细胞V区基因突变。不能产生能针对自身蛋白抗体的机理在于辅助T细胞免疫耐受。

目前认为维持体内自身免疫耐受状态的主要机制是在中枢免疫器官发生的T细胞克隆清除，在外周中诱导自身潜能细胞进入免疫无能(anergy)状态，及部分淋巴细胞对自身蛋白的免疫忽视(ignorance)。内源性蛋白的表位可与B细胞结合，但不能诱导B细胞产生抗体

现有的技术是与外源性强抗原蛋白，免疫学上称之谓免疫载体(immunocarrier)的蛋白化学偶联，引入外源性蛋白用于活化Th细胞。经载体蛋白活化Th细胞，才可诱导B细胞产生抗体。在免疫应答中，B细胞识别内源性蛋白抗原表位，并提呈载体蛋白表位给CD4+Th细胞，Th细胞识别载体蛋白表位，这样载体就可把特异T-B细胞连接起来(T-B桥联)，T细胞才能激活B细胞。