[发明专利]一种突变蛇毒纤溶酶工程菌株,其制备方法和应用

权利要求书

1.一种酵母表达载体，其出发载体为pPIC9K，其特征在于，含有突变蛇毒纤溶酶基因，所述的突变蛇毒纤溶酶基因的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

2.含有权利要求1所述表达载体的工程菌株，其特征在于，所述出发菌为酵母株为GS115。

3.制备权利要求2所述工程菌株的方法，其特征在于，构建含突变蛇毒纤溶酶基因的表达载体pPIC9K-His6-Alf，并将其线性化后导入到酵母株GS115，获得重组工程菌。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的表达载体pPIC9K-His6-Alf通过电转法导入到酵母株GS115中。

5.一种利用权利要求2所述工程菌株制备突变蛇毒纤溶酶的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)在BMG/MY液体培养基中培养，甲醇诱导表达，培养5天后，取菌液少量，高速离心，上清用硫酸铵溶液处理，离心，去上清，沉淀复溶；

2)将步骤1)中复溶的溶液用亲和层析柱纯化，获得纯化蛋白液。

6.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，还包括将步骤2)获得的纯化蛋白用肠激酶切割，再用硫酸铵沉淀离心，沉淀经透析复溶，得到活性蛇毒纤溶酶。

7.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述的甲醇采用分批滴加的方式加入培养液中，每天一次，添加量为1％～1.5％。

8.如权利要求5或6所述的制备方法，其特征在于，所述的加入硫酸铵后溶液中硫酸铵的终浓度为质量分数45％～50％。。