[发明专利]食源性致病菌的表面增强拉曼光谱鉴别方法

权利要求书

1.一种食源性致病菌的表面增强拉曼光谱鉴别方法，其特征在于，该方法为：采用金或银纳米溶胶作为增强试剂，以表面增强拉曼光谱对食源性致病菌进行检测，经对检测结果进行聚类分析，实现对食源性致病菌的鉴别。

2.根据权利要求1所述的食源性致病菌的表面增强拉曼光谱鉴别方法，其特征在于，该方法具体为：

取食源性致病菌中的至少一种制成活化菌株标准样品，并将活化菌株标准样品与金或银纳米溶胶充分混合后以拉曼光谱进行检测，其后将检测结果进行聚类分析，并由此鉴别食源性致病菌的种属；

所述食源性致病菌至少包括沙门氏菌、埃希氏大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和单增李斯特菌；

所述金或银纳米溶胶的使用量与致病菌的用量在1毫摩尔∶100活菌数～1毫摩尔∶30000活菌数之间。

3.根据权利要求1或2所述的食源性致病菌的表面增强拉曼光谱鉴别方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

(1)活化菌株标准样品的制备

取食源性致病菌中的至少一种的菌种在LB固体培养基上于30-37℃划线培养24-48h，其后挑取分散的单一菌落置于水中振荡，而后在5000-10000rmp离心处理5-30min，离心沉淀物经洗涤后，制成活化菌株标准样品，所述食源性致病菌至少包括沙门氏菌、埃希氏大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和单增李斯特菌；

(2)拉曼光谱检测

将拉曼光谱表面增强试剂与上述活化菌株标准样品以1毫摩尔∶100活菌数～1毫摩尔∶30000活菌数的用量比例混合、振荡，使两者充分结合，而后以拉曼光谱进行检测；

(3)数据处理

将标准样品的拉曼光谱检测结果进行聚类分析，由此鉴别食源性致病菌的种属。

4.根据权利要求3所述的食源性致病菌的表面增强拉曼光谱鉴别方法，其特征在于，步骤(2)中拉曼光谱仪的测定条件设为：激光功率范围：20-300mw，扫描时间：2-20s。

5.根据权利要求3所述的食源性致病菌的表面增强拉曼光谱鉴别方法，其特征在于，步骤(2)中活化菌株标准样品与增强试剂混合、振荡的时间为2-60s。

6.根据权利要求3所述的食源性致病菌的表面增强拉曼光谱鉴别方法，其特征在于，步骤(3)中是通过比对食源性致病菌的拉曼光谱图中各峰峰值来鉴别食源性致病菌种属的。

7.根据权利要求1或2所述的食源性致病菌的表面增强拉曼光谱鉴别方法，其特征在于，所述金纳米溶胶的制备方法为：

将0.30-1.50mg/mL氯金酸钾溶液置入温度为105-135℃的条件下煮沸，加入的柠檬酸钠溶液浓度为0.1wt％-10wt％，煮沸5-95min，制得金纳米溶胶。

8.根据权利要求3所述的食源性致病菌的表面增强拉曼光谱鉴别方法，其特征在于，该方法包括如下具体步骤：

(1)活化菌株标准样品的制备

至少取沙门氏菌、埃希氏大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和单增李斯特菌的菌种分别在LB固体培养基上于30-37℃划线培养24-48h，其后挑取分散的单一菌落置于水中振荡，而后在5000-10000rmp离心处理5-30min，离心沉淀物经洗涤后，制成至少四种活化菌株标准样品；

(2)拉曼光谱检测

将拉曼光谱表面增强试剂与上述活化菌株标准样品混合、振荡，使两者充分结合，而后以拉曼光谱进行检测；

(3)数据处理

将各标准样品的拉曼光谱检测结果进行聚类分析，由此建立可用于鉴别和区分食源性致病菌的种属的聚类分析图；

(4)参照步骤(2)的操作，以拉曼光谱检测一种以上未知菌种样品，将所得拉曼光谱检测结果与步骤(2)所得上述标准样品的拉曼光谱检测结果和步骤(3)所得聚类分析图进行比对，从而鉴定未知菌种的种属。