[发明专利]融合蛋白及其在制备人白血病抑制因子中的应用

权利要求书

1.一种融合蛋白，自氮末端至碳末端依次包括Trx蛋白、肠激酶特异识别位点和huLIF成熟核心蛋白；所述肠激酶特异识别位点的碳末端与所述huLIF成熟核心蛋白的氮末端连接；所述Trx蛋白如序列表的序列1自氮末端第1至110位氨基酸残基所示；所述肠激酶特异识别位点如序列表的序列1自氮末端第152至156位氨基酸残基所示；所述huLIF成熟核心蛋白如序列表的序列1自氮末端第157至336位氨基酸残基所示。

2.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于：所述融合蛋白还包括组氨酸标签；所述组氨酸标签位于所述Trx蛋白和所述肠激酶特异识别位点之间；所述组氨酸标签如序列表的序列1自氮末端第117至122位氨基酸残基所示。

3.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于：所述融合蛋白为如下(a)或(b)：

(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(b)将序列表中序列1所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且含有所述huLIF成熟核心蛋白的由序列1衍生的蛋白质。

4.权利要求1至3中任一所述融合蛋白的编码基因。

5.如权利要求4所述的编码基因，其特征在于：所述huLIF成熟核心蛋白的编码基因如序列表的序列2自5’末端第469至1011位核苷酸所示；所述肠激酶特异识别位点的编码基因如序列表的序列2自5’末端第454至468位核苷酸所示。

6.如权利要求5所述的编码基因，其特征在于：所述融合蛋白的编码基因是如下(1)或(2)或(3)的DNA分子：

(1)序列表中序列2所示的DNA分子；

(2)在严格条件下与(1)限定的DNA序列杂交且可以表达所述huLIF成熟核心蛋白的DNA分子；

(3)与(1)限定的DNA序列至少具有90％同源性且可以表达所述huLIF成熟核心蛋白的DNA分子。

7.含有权利要求4至6中任一所述编码基因的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌。

8.如权利要求7所述的重组载体，其特征在于：所述重组载体为在pET-32a(+)的BglII和SacI酶切位点之间插入序列表的序列3所示的DNA得到的重组质粒pET-Trx-His₆-Erk-huLIF*；所述重组菌为将所述重组质粒pET-Trx-His₆-Erk-huLIF*导入大肠杆菌E.coliBL21(DE3)得到的重组菌。

9.权利要求1至3中任一所述融合蛋白、权利要求4至6中任一所述编码基因，权利要求7或8所述的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌中的任意一种在制备huLIF成熟核心蛋白中的应用；所述huLIF成熟核心蛋白如序列表的序列1自氮末端第157至336位氨基酸残基所示。

10.一种制备huLIF成熟核心蛋白的方法，包括如下步骤：

(1)将权利要求8所述重组菌进行诱导表达和纯化；

(2)用肠激酶处理步骤(1)得到的溶液，

(3)将步骤(2)得到的溶液进行纯化，得到huLIF成熟核心蛋白；所述huLIF成熟核心蛋白如序列表的序列1自氮末端第157至336位氨基酸残基所示。