[发明专利]模板线性扩增和多生物素信号的双重放大方法

权利要求书

1.一种模板线性扩增和多生物素信号的双重放大方法，其特征在于，包括步骤有：

核酸分离，从标本中分离核酸；

T7 RNA聚合酶线性扩增，得到RNA产物；以及，

将线性扩增的RNA产物捕获到微孔板上，进行信号放大。

2.如权利要求1所述的双重放大方法，其特征在于，对于该核酸是DNA的情况，在线性扩增之前还包括：在加入转录酶之前采用加热或NaOH/HCl进行变性；与第一条引物退火后，DNA聚合酶可用于第一链和第二链的合成一带有一设定启动子的dsDNA。

3.如权利要求1所述的双重放大方法，其特征在于，对于该核酸是RNA的情况，在线性扩增之前还包括将该RNA转化为dsDNA的过程。

4.如权利要求3所述的双重放大方法，其特征在于，将该RNA转化为dsDNA的过程包括：以带有一设定启动子的引物用反转录酶AMV或MMLV将该RNA转变成cDNA，再用RNase H处理，使RNA/DNA变成单链的cDNA，在DNA聚合酶和第二条引物作用下，以合成该dsDNA。

5.如权利要求3所述的双重放大方法，其特征在于，将该RNA转化为dsDNA的过程包括：以带有一设定启动子的引物用反转录酶AMV或MMLV将该RNA转变成cDNA；该cDNA通过92度加热变性，与第二条引物退火后，用DNA聚合酶制备该dsDNA。

6.如权利要求3所述的双重放大方法，其特征在于，将该RNA转化为dsDNA的过程包括：以带有一设定启动子的引物用反转录酶AMV或MMLV将该RNA转变成cDNA；该cDNA通过92度加热变性，与第二条引物退火后，通过PCR的一个循环以合成该dsDNA。

7.如权利要求3所述的双重放大方法，其特征在于，将该RNA转化为dsDNA的过程包括：通过一设定启动子制备dsDNA是采用NASBA描述的步骤，其具体包括AMV反转录酶、RNase H和T7 RNA聚合酶与二条引物一起加入，其中一条引物带有T7启动子。

8.如权利要求2、4、5、6或7所述的双重放大方法，其特征在于，该设定启动子为T7、T3或SP6启动子，或者T7 、T3或SP6 RNA 聚合酶。

9.如权利要求1所述的双重放大方法，其特征在于，该信号放大的过程具体包括：通过一多生物素分子的连接对该RNA产物进行放大，该多生物素分子包括通过杂交识别连接物分子的单链DNA分子和用于生物素标记的载体分子。

10.如权利要求9所述的双重放大方法，其特征在于，该载体分子上的生物素为通过酶反应或化学反应杂交标记的生物素。