[发明专利]灵芝异黑色素的提取与制备方法及其用途

权利要求书

1.一种灵芝异黑色素的提取方法，其特征在于：从灵芝中提取异黑色素，异黑色素的形状为黑色粉末状，元素组成为C54.4%、H4.2%、N2.9%、S1.9%，为邻苯二酚型植物源异黑色素；

所述灵芝异黑色素是多酚物质在多酚氧化酶和酚羟基酶的作用下转化为羟基醌，进而聚合形成邻苯二酚型植物源异黑色素；

所述灵芝异黑色素的紫外光谱（UV）：用0.01M NaOH溶解，200~800nm全波段扫描，灵芝异黑色素在紫外波长下的最大吸收峰在221nm处，并随波长增加，其吸收值下降；

所述灵芝异黑色素的红外光谱（IR）：用KBr压片400~4000 cm^-1扫描，具有经典的异黑色素红外吸收特征，其中3450 cm^-1附近的吸收峰是由-O-H的伸缩振动产生的，1710 cm^-1处的弱吸收峰是羰基伸缩振动引起的，1620 cm^-1强吸收峰是芳环骨架、酰胺I键振动产生的，1510 cm^-1附近弱吸收峰为酰胺II键的振动峰，在860~650 cm^-1范围内的吸收带很弱，表明芳环被取代，形成了共轭体系；

所述灵芝异黑色素的氢核磁共振（¹H NMR）：在以δ 0.95 ppm为中心的吸收峰是脂肪烃末端甲基的质子吸收峰；在以δ 1.4 ppm为中心的吸收峰是直链或支链烷烃基团中的亚甲基峰；在以δ 2.0 ppm为中心和δ 2.6 ppm为中心的两组峰是烷氢受弱吸电子基团作用产生位移的峰；在δ 3.3-3.8 ppm区域内的组峰，应是与电负性较强的基团相连的氢；在δ 4.0-5.0 ppm区域无吸收峰，说明分子中不存在>C=CH₂结构；在δ 6.0-8.1 ppm区域内的宽峰，归结于芳氢的吸收峰。

2.一种灵芝异黑色素的制备方法，其特征在于，灵芝异黑色素由以下步骤制得：

（1）将灵芝用乙醇脱脂，得脱脂干品；

（2）将脱脂干品用酸溶液提取，然后过滤弃去酸提液，取酸提后滤渣；

（3）将酸提后滤渣用碱溶液提取、过滤，得到碱提液；

（4）将碱提液微滤除不溶物，纳滤脱盐，然后干燥得异黑色素粗提物，异黑色素粗提物可另外用于药效学的试验；

（5）将异黑色素粗提物置于酸溶液中水解，分离得到异黑色素；

（6）将异黑色素依次用乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯洗涤，每种溶剂反复洗涤至离心后上清液无色为止；

（7）将有机溶剂洗涤后异黑色素用碱溶液溶解，得到异黑色素溶液，加入酸溶液静置沉淀，并反复碱溶酸沉至酸化后离心至上清液无色，沉淀后的溶液再经分离得到异黑色素沉淀；

（8）将异黑色素沉淀用水清洗，至Cl^-1定性检测为阴性为止，干燥后得到成品灵芝异黑色素。

3.根据权利要求2所述的灵芝异黑色素的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中使用50%~95%的乙醇进行脱脂，脱脂温度为室温至醇沸点温度，脱脂时间为1~5 h，脱脂次数为1~5次，灵芝与醇溶液的配比按灵芝的重量：醇溶液的体积=1:10~80。

4.根据权利要求2所述的灵芝异黑色素的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中酸提时所用的酸溶液为盐酸、磷酸、乙酸中的至少一种物质的水溶液，浓度为0.1~6 M的盐酸，或体积浓度为20%~30%的磷酸，或体积浓度为20%~30%的乙酸，酸提温度为室温至100℃，酸提时间为1~5 h，酸提次数为1~5次。

5.根据权利要求2所述的灵芝异黑色素的制备方法，其特征在于：所述步骤（3）中碱提时所用的碱溶液为氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸氢钠、氨水中的至少一种物质的水溶液，浓度为0.1~5 M的氢氧化钠，或0.1~5 M的氢氧化钾，或0.1~5 M的碳酸钠，或0.1~5 M的碳酸氢钠，或10%~40%的氨水，碱提温度为40℃~100℃，碱提时间为1~5 h，碱提次数为1~5次。

6.根据权利要求2所述的灵芝异黑色素的制备方法，其特征在于：所述步骤（4）中微滤时采用孔径为10~30 μm的滤膜进行微滤以去除不溶物；其中纳滤时采用分子量截留规模为200Da~800Da的纳滤膜进行纳滤脱盐。