[发明专利]一种鉴别鹅品种的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种鹅品种鉴别方法，特别涉及通过微卫星荧光标记全自动基因分型技术鉴别鹅品种的方法，属于分子生物学技术领域。

背景技术

我国是世界养鹅大国，年出栏量占世界的70％，我国也是世界鹅品种资源最丰富的国家之一，拥有26个地方品种资源，近年来，随着市场经济的不断发展，在鹅的生产与经营、新品种培育和品种权益保护以及流通加工等领域急需快速高效的鹅品种鉴定方法，目前鉴定家禽品种主要有形态鉴定、同工酶鉴定、简单重复序列(Simple sequence repeat，SSR)鉴定等。然而上述方法均存在不同程度的局限性，如形态特征易受环境影响，可靠性差；同工酶、SSR标记分辨率较低，对于亲缘关系较近的品种间往往无法区分，其重复性也差。微卫星荧光标记全自动基因分型技术是新近发展起来的一项检测技术，该技术是利用3种不同颜色的荧光染料标记微卫星引物，可以将多种不同荧光标记和不同扩增片段的产物在同一加样孔中电泳，并且可将待测产物与内在分子量标准同时上样，通过序列凝胶电泳，GeneMapper软件进行图像分析，精确计算出微卫星等位基因片段大小。

发明内容

本发明目的在于提供一种鹅品种鉴别的方法，其主要通过微卫星荧光标记全自动基因分型技术对鹅品种进行鉴定。

本发明以DNA全自动基因分析仪为平台，结合荧光-多重PCR技术，采用GeneScan-500标准，对不同鹅品种个体进行扫描，获得不同品种特有等位基因，构建鹅STR标准遗传图谱，根据待检测样本的STR图谱与标准图谱比较，鉴定待测样本的品种真实性。

本发明的技术方案包括如下步骤：

(1)鹅短串联重复序列(short tandem repeats，STR)标准遗传图谱构建：

提取来自国家级保种场的鹅品种基因组DNA，将下述10对STR引物，采用荧光标记，结合多重PCR技术对基因组DNA进行扩增，通过ABI 3730XLDNA全自动基因分析仪对不同个体进行扫描，以GeneScan-500为标准内参，利用GeneMapper 4.0软件进行图像分析，精确测量出微卫星等位基因片段大小，获得不同品种特有等位基因，并构建不同品种鹅的STR标准遗传图谱；

第1对引物序列如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示；

第2对引物序列如SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示；

第3对引物序列如SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示；

第4对引物序列如SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8所示；

第5对引物序列如SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：10所示；

第6对引物序列如SEQ ID NO：11和SEQ ID NO：12所示；

第7对引物序列如SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：14所示；

第8对引物序列如SEQ ID NO：15和SEQ ID NO：16所示；

第9对引物序列如SEQ ID NO：17和SEQ ID NO：18所示；

第10对引物序列如SEQ ID NO：19和SEQ ID NO：20所示；

(2)待检测样本的STR图谱的获得：

提取待检测样本的鹅品种基因组DNA，采用上述相同引物进行多重PCR扩增和扫描，获得检测样本的鹅品种得STR图谱；

(3)待检测样本的品种鉴定：

将待检测样本的STR图谱与标准图谱相比较，鉴定待测样本的品种真实性。

本发明相比于现有的鉴定方法，其具有快速、准确、可重复性好、成本低等优点。

附图说明

图1是皖西白鹅的STR标准遗传图谱。

图2是浙东白鹅STR标准遗传图谱。

图3是四川白鹅STR标准遗传图谱。

图4是太湖鹅STR标准遗传图谱。

图5是狮头鹅STR标准遗传图谱。

图6是豁眼鹅STR标准遗传图谱。

图7是武冈铜鹅STR标准遗传图谱。

图8是马岗鹅STR标准遗传图谱。

图9乌鬃鹅STR标准遗传图谱。

图中各编号对应的位点为1：I-1；2：II-1；3：III-3；4：II-2；5：III-1；6：III-2；7：II-3；8：IV-3；9：IV-2；10：IV-1。

具体实施方式

1、鹅STR标准遗传图谱构建

(1)不同鹅品种基因组DNA的提取(样本量)