[发明专利]用于治疗重症肌无力的抗体靶向补体调节因子融合蛋白

说明书

1.技术领域

本发明属于医药生物技术领域，具体涉及基因克隆、外源基因在原核系统的中的表达、蛋白纯化、包涵体复性、乙酰胆碱受体特异性单链抗体与补体调节因子(DAF)融合蛋白(scFv-DAF)的体外活性测定及其细胞水平的补体攻击保护试验。目的在于研制开发一种新的治疗重症肌无力的生物制剂scFv-DAF，可以通过抑制重症肌无力患者体内的病理性致病因子-乙酰胆碱受体自身抗体与乙酰胆碱受体结合及补体系统的激活，保护乙酰胆碱受体和消除补体系统激活引起的免疫损伤从而治疗重症肌无力。具有重要应用前景和意义。

2.背景技术

重症肌无力(MG)是一种严重危害患者身心健康的最典型的自身免疫性疾病之一，它有明确的抗原、抗体及病理作用靶点-神经肌肉接头(NMJ)，是研究其它自身免疫性疾病发病机制和治疗的最理想的模型之一。虽然，目前重症肌无力患者的治疗采用胆碱酯酶抑制剂、免疫调节或抑制剂及胸腺摘除等，但疗效均不理想。以往重症肌无力的治疗研究多集中于患者体内的病理性致病因子-乙酰胆碱受体抗体，T细胞、免疫疫苗、炎性细胞因子、B细胞等，而在重症肌无力发病过程中起重要作用的补体/补体调节因子的作用则没有引起足够重视。重症肌无力患者和重症肌无力动物模型体内的病理性致病因子-乙酰胆碱受体抗体和神经肌肉接头处的乙酰胆碱受体结合，激活大量的补体并沉积于神经肌肉接头处溶解、破坏突触后膜和乙酰胆碱受体，致神经肌肉接头处传递障碍，出现肌肉收缩无力。目前，大量资料表明补体系统激活引起的神经肌肉接头免疫损伤，在重症肌无力发病过程中起非常重要的作用。

单链抗体(scFv)是由抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)经连接链连接而成。单链抗体是具有亲代抗体全部抗原结合特异性的最小功能结构单位，因其相对分子质量小、穿透力强、免疫原性低而备受关注。乙酰胆碱受体单链抗体具有以下特点：(1)结构上是由抗体重链可变区(VH)-连接链(G₄S₁)₃-轻链可变区(VL)构成，是没有Fc段的单价抗体，其大小是抗体全长的六分之一；(2)乙酰胆碱受体单链抗体只有1个抗原结合位价，只能与乙酰胆碱受体上两个α-亚单位中的一个主要免疫原区结合，不会引起乙酰胆碱受体分子之间的交联导致的抗原调变；(3)此外，乙酰胆碱受体单链抗体没有Fc段，所以不能激活补体，从而避免了补体系统激活而引起的免疫损伤；(4)乙酰胆碱受体单链抗体能够特异性的与乙酰胆碱受体结合，封闭、阻断重症肌无力患者体内致病因子-乙酰胆碱受体抗体与乙酰胆碱受体结合，一方面保护乙酰胆碱受体免受重症肌无力患者体内致病性乙酰胆碱受体抗体的攻击，另一方面，这一特性使得单链抗体成为理想的靶向工具；