[发明专利]一种大豆抗原蛋白过敏细胞模型及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种大豆抗原蛋白过敏细胞模型及其应用。

背景技术

大豆作为人和动物优质的植物蛋白和油脂来源，具有极高的营养价值。其所含蛋白质约占大豆籽粒的40％。但是，大豆中含有胰蛋白酶抑制因子、凝集素、异黄酮、抗原蛋白等多种抗营养因子。其中大豆抗原蛋白是大豆中能引起人和畜禽过敏反应的一类蛋白质，主要包括：大豆疏水蛋白(免疫学命名为Gly m1)、大豆壳蛋白(Gly m2)、大豆抑制蛋白(Gly m3)、大豆胰蛋白酶抑制因子、大豆球蛋白(glycinin)、β-伴大豆球蛋白(β-conglycinin)等。目前研究证实，大豆球蛋白和β-伴大豆球蛋白是含量最丰富，免疫原性较强的大豆抗原蛋白，两者共占大豆籽实总蛋白的65-80％。

研究表明，在大豆抗原蛋白分子上有IgE抗原决定簇，被人和动物食入后，可引起致敏人群或动物体内IgE抗体升高，从而导致过敏反应的发生。此外，值得重视的是，某些种类的大豆抗原蛋白如大豆球蛋白和β-伴大豆球蛋白具有热稳定特性，普通的热处理对其破坏作用较小。例如，烘烤大豆粉中具有抗原活性的大豆抗原蛋白残留量仍高达18％，这个量足以引起婴儿的过敏反应。

由于抗原活性的存在，大豆抗原蛋白对仔猪、犊牛及其它幼龄畜禽的生长和健康造成了一定的危害。因此，将大豆进行适当的加工处理以减少或消除大豆抗原蛋白的抗原活性成了当前科学界的一个重要研究目标。目前已证实，豆粕、膨化大豆、发酵豆粕、大豆浓缩蛋白和大豆分离蛋白等大豆制品的抗原活性低于生大豆。但是，在大豆加工参数和大豆抗原蛋白抗原活性的致敏临界值方面还没有一个统一的认识，其原因主要是大豆抗原蛋白种类繁多，抗原活性的定量检测技术非常薄弱。已有的定量检测方法主要以抗血清测定、单克隆抗体ELISA技术、高效液相色谱分析、动物过敏性模型评价为主。这些方法从免疫学角度来看仍存在一定的缺陷，抗血清测定检测的灵敏度较低，而且重复性差；单克隆抗体ELISA技术需要针对每种大豆抗原蛋白分别制备单克隆抗体，然后制备试剂盒，工程复杂而工作量巨大；高效液相色谱分析则无法体现免疫反应性，并且由于前处理过程繁琐和需要昂贵的专门仪器而难以广泛应用于大豆制品的现场检测；同时，以上三种方法作为体外检测方法，检测的结果仅代表某种大豆抗原蛋白的含量，并不能直接显示其抗原性的强弱。过敏性动物模型作为唯一的体内过敏性评价方法，虽然可以直接显示过敏性强弱，但难以定量，同时完成评价需要大量的动物，工作量大，个体差异明显，而且不符合动物保护和动物福利原则。

RBL细胞是1973年由英国学者Eccleston等从嗜碱性白血病大鼠中分离得到的；RBL-2H3细胞系是由美国Barsumian研究小组(1981)将RBL反复克隆获得的亚系。由于RBL-2H3细胞系具有永生化特性，培养方法简单，体外脱颗粒方法容易重复，所以是建立脱颗粒模型的最佳选择。以前认为RBL细胞系是一种嗜碱性细胞，但近些年在对其糖蛋白量、蛋白酶标志和超微结构等的研究后发现，它是一种粘膜型的肥大细胞，现已广泛用于研究肥大细胞体外脱颗粒的研究和运用。

发明内容

本发明的目的是提供一种制备大豆抗原蛋白过敏细胞模型的方法。

本发明提供的制备大豆抗原蛋白过敏细胞模型的方法，包括如下步骤：

将肥大细胞与大豆抗原蛋白特异性IgE抗体共孵育，孵育后的细胞，即为大豆抗原蛋白过敏细胞模型。

所述大豆抗原蛋白特异性IgE抗体通过如下方法制备：将大豆抗原蛋白免疫动物，得到抗血清，即得到大豆抗原蛋白特异性IgE抗体；

所述大豆抗原蛋白为大豆总抗原蛋白、大豆胰蛋白酶抑制因子、β-伴大豆球蛋白和/或大豆球蛋白。

所述大豆抗原蛋白过敏细胞模型为如下1)-4)中任一所述过敏细胞模型：

1)为通过如下方法制备：将肥大细胞和大豆胰蛋白酶抑制因子抗血清共孵育，得到孵育后的细胞，即为大豆胰蛋白酶抑制因子过敏细胞模型；

2)为通过如下方法制备：将肥大细胞和大豆总抗原蛋白抗血清共孵育，得到孵育后的细胞，即为大豆总抗原蛋白过敏细胞模型；

3)为通过如下方法制备：将肥大细胞和β-伴大豆球蛋白抗血清共孵育，得到孵育后的细胞，即为β-伴大豆球蛋白过敏细胞模型；

4)为通过如下方法制备：将肥大细胞和大豆球蛋白抗血清共孵育，得到孵育后的细胞，即为大豆球蛋白过敏细胞模型。

所述大豆胰蛋白酶抑制因子抗血清通过如下方法制备：将大豆胰蛋白酶抑制因子免疫动物，分离血清，即得到大豆胰蛋白酶抑制因子抗血清；