[发明专利]一种利用LAMP法快速检测转基因玉米的方法无效
| 申请号： | 201010578779.7 | 申请日： | 2010-12-08 |
| 公开（公告）号： | CN101985661A | 公开（公告）日： | 2011-03-16 |
| 发明（设计）人： | 吴忠义;黄丛林;张秀海;陈金松;罗昌;程曦;梁宏霞;李春华 | 申请（专利权）人： | 北京农业生物技术研究中心 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京国林贸知识产权代理有限公司 11001 | 代理人： | 李桂玲;孔祥玲 |
| 地址： | 100097 北京市海淀*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 利用 lamp 快速 检测 转基因 玉米 方法 | ||
1.一种利用LAMP法快速检测转基因玉米的方法，其特征在于：该方法利用环介导等温扩增反应(LAMP)检测转基因玉米中的抗草丁膦Bar基因。
2.根据权利要求1所述的快速检测转基因玉米的方法，其特征在于：该方法包括的步骤依次为：
A．配制反应体系；
所述的反应体系中包括：
Betaine 0.3-1.5mol/L，
dNTP 0.2-3.5mmol/L，
Mg2+ 2-18mmol/L，
内引物，外引物；所述的内引物和外引物的浓度之比为1-8：1；
Bst DNA聚合酶大片段，Bst polymerse buffer， DNA模板， ddH2O；
B．将所述的反应体系进行温育处理，得到温育产物；该温育处理的温度为65℃，时间为30-80min；
C．将所述的温育产物进行灭活处理，得到灭活产物；该灭活处理的温度为80℃，时间为5-15min；
D．将所述的灭活产物进行检测，得到检测结果。
3.根据权利要求2所述的快速检测转基因玉米的方法，其特征在于：所述的反应体系中包括：
Betaine 0.3-1.3mol/L，
dNTP 1-2.5mmol/L，
Mg2+ 6-14 mmol/L ，
外引物，内引物，所述的内引物和外引物的浓度之比为4-10：1。
4.根据权利要求2所述的快速检测转基因玉米的方法，其特征在于：所述的反应体系中包括：
Betaine 0.5mol/L，
dNTP 1mmol/L，
Mg2+ 8mmol/L ，
外引物，内引物，所述的内引物和外引物的浓度之比为8：1。
5.根据权利要求2所述的快速检测转基因玉米的方法，其特征在于：所述的反应体系中包括：
Betaine 0.5mol/L，
dNTP 1mmol/L，
Mg2+ 8mmol/L ，
外引物，内引物，所述的内引物和外引物的浓度之比为4：1。
6.根据权利要求2所述的快速检测转基因玉米的方法，其特征在于：所述的反应体系中包括：
Betaine 0.5mol/L，
dNTP 2 mmol/L，
Mg2+ 6mmol/L ，
外引物，内引物，所述的内引物和外引物的浓度之比为4：1。
7.根据权利要求2所述的快速检测转基因玉米的方法，其特征在于：所述的反应体系中包括：
Betaine 0.5mol/L，
dNTP 1mmol/L，
Mg2+ 6mmol/L ，
外引物，内引物，所述的内引物和外引物的浓度之比为4：1。
8.根据权利要求2所述的快速检测转基因玉米的方法，其特征在于：所述的反应体系中包括：
Betaine 0.5mol/L，
dNTP 1mmol/L，
Mg2+ 6mmol/L ，
外引物，内引物，所述的内引物和外引物的浓度之比为8：1。
9.根据权利要求3所述的快速检测转基因玉米的方法，其特征在于：所述的外引物的核苷酸序列为：
5’-ACGGGACTGGGCTCCA-3’
5’-ACCGGCAGGCTGAAGTC-3’。
10.根据权利要求3所述的快速检测转基因玉米的方法，其特征在于：所述的内引物的核苷酸序列为：
5’-GCAGCCCGATGACAGCGACCCTGCTGAAGTCCCTGGAG-3’
5’-GGATATGCCCCCCGTGGCACCAGAAACCCACGTCATGC-3’。
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