[发明专利]油桐油酸脱氢酶基因突变体SNP232及其获得方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域中的基因突变体，尤其涉及一种油桐油酸脱氢酶基因突变体SNP²³²及其获得方法。

背景技术

脂肪酸脱氢酶基因(fad2)是控制油酸向亚油酸转化的关键基因，且关系到多不饱和脂肪酸的合成；而亚油酸是桐酸合成的底物。因而fad2基因的功能突变不仅会改变桐油中脂肪酸组分含量，而且会影响桐油的品质。目前通过人工诱发fad2基因的突变，抑制fad2基因的表达，获得了高油酸含量的葵花籽油、大豆油等，而且在油菜中，不仅获得了高油酸突变体品种，且利用转基因获得了特高油酸转基因油菜株系。但是对于油桐中fad2基因的突变，目前国内外尚未见报道。

油桐是我国原产的多年生木本油料树种，其种子榨出的桐油不仅是重要的工业原料也是重要的生物柴油原料。因而利用遗传资源多样性结合生物技术途径，对于油桐进行脂肪酸组成的全方位改良和培育含特种脂肪酸的油桐品种，提升桐油品质及经济价值具有重要科学与现实意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种油桐油酸脱氢酶基因突变体SNP²³²及其获得方法。

本发明的目的是这样实现的：

1、油桐油酸脱氢酶基因突变体SNP²³²

油桐油酸脱氢酶基因突变体SNP²³²是SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列中第232位碱基发生C→A突变，导致SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列中第78位氨基酸由脯氨酸(P)转变为苏氨酸(T)。

2、油桐油酸脱氢酶基因突变体SNP²³²的获得方法

(1)来源于油桐种质材料PT45或PT60，见表1。

表1突变体材料具体地理位置

(2)检测步骤

①提取突变体材料叶片DNA；

②fad2基因编码区的PCR扩增；

③DNA测序分析。

本发明具有下列优点和积极效果：

①本发明所涉及的fad2基因突变体SNP²³²导致了SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列中第78位氨基酸由脯氨酸(P)转变为苏氨酸(T)；

②本发明所涉及的fad2基因突变体SNP²³²种质材料中，SEQ ID NO：2所示的氨基酸的变化导致了桐油中桐酸含量的增加；

③本发明所涉及的fad2基因突变体SNP²³²种质材料中，SEQ ID NO：2所示的氨基酸的变化导致了桐油中不饱和脂肪酸含量的增加；

④本发明所涉及的fad2基因突变体SNP²³²种质材料中脂肪酸组分的变化对于利用生物技术途径，进一步对桐油进行脂肪酸组成的全方位改良和培育含特种脂肪酸的油桐品种具有重要科学与现实意义。

由此可见，该基因突变体及相应的种质材料，对于提高桐酸的含量、调整桐油脂肪酸组分、改良桐油的品质等具有重要作用。

附图说明

图1是含SNP²³²突变体的种质材料PT45脂肪酸组分色谱图；

图2是含SNP²³²突变体的种质材料PT60脂肪酸组分色谱图；

图3是不含SNP²³²突变体的野生型种质材料PT292脂肪酸组分色谱图；

图4是利用Sequencher软件对多个序列比对发现的SNP²³²反向测序序列峰图(箭头表示突变位点)。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施例，进一步阐述本发明：

1、检测步骤

fad2基因其mRNA序列来自GenBank(AF525534.1)。

①提取突变体材料叶片DNA

采用改良的CTAB法。

②fad2基因编码区的PCR扩增

模板DNA(20ng/μL)5μL；引物(10μM)各1μL；10×buffer(Mg²⁺Plus)2.5μL；Taq酶(5U/μL)0.2μL；dNTP(10mM)0.5μL；ddH₂O 15.3μL；总体积25μL。PCR反应程序为94℃预变性5min；94℃变性45s；67℃退火45s；72℃延伸1min；30个循环；最后72℃延伸5min；扩增产物在1.5％的琼脂糖凝胶电泳中检测。

③DNA测序分析