[发明专利]血液中支链氨基酸含量的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种血液中支链氨基酸含量的检测方法。

背景技术

支链氨基酸包括亮氨酸(Leucine)、异亮氨酸(Isoleucine)和缬氨酸(Valine)三种氨基酸。

亮氨酸在调节氨基酸与蛋白质代谢方面起重要作用。它是骨骼肌与心肌中唯一可调节蛋白质周转的氨基酸；能促进骨骼肌蛋白质的合成。异亮氨酸是人类的必需氨基酸之一，其功能主要是维持机体平衡，治疗精神障碍；促进食欲的增加和抗贫血的作用；人体一旦缺乏异亮氨酸，会出现体力衰竭，昏迷等症状。缬氨酸是一种必需氨基酸，它的功能包括：给肌肉提供额外的能量，以防止肌肉衰弱；从肝脏清除多余的氮，并将身体需要的氮运输到各个部位；有助于治疗肝胆疾病；促使神经系统功能正常。支链氨基酸在体内起着重要作用，主要包括：氧化供能；参与肌肉合成；预防和减轻中枢疲劳；刺激相关激素的分泌：亮氨酸可以间接刺激胰岛素、生长激素的分泌释放，具有促进肌肉蛋白质合成和抗分解的双重作用。

支链氨基酸属于必需氨基酸，主要作用于骨骼肌代谢，约占骨骼肌蛋白质的必需氨基酸的35％，能帮助身体强力阻抗肌肉分解、营养的流失并增加肌肉抗压能力；经过动物实验证明，“支链氨基酸”使小白鼠的生命延长了12％；且与一些代谢性疾病关系密切，如枫糖尿症。因此定量分析支链氨基酸含量对研究营养学和体内代谢过程具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种特异性强、准确度和灵敏度高的血液中支链氨基酸含量的检测方法。

本发明所提供的血液中支链氨基酸含量的检测方法，包括如下步骤：

标准品、待测血清样本分别和同位素内标溶液混匀；离心，取上清液，吹干；加入流动相复溶液，超声溶解；离心，取上清液，与流动相一起流经色谱柱进入液相色谱-质谱分析，定量血液中支链氨基酸的含量。

本发明的血液中支链氨基酸含量的检测方法，其中：所述流动相复溶液和流动相为含2-8‰全氟代庚酸的乙腈水溶液或甲醇水溶液。

本发明的血液中支链氨基酸含量的检测方法，其中：所述流动相复溶液中乙腈或甲醇的体积百分比含量为20-70％。

本发明的血液中支链氨基酸含量的检测方法，特异性强、准确度和灵敏度高、分析时间短，为临床上研究营养学、体内代谢过程及枫糖尿症等代谢性疾病提供准确性高、特异性强及灵敏度高的检测方法。本发明的血液中支链氨基酸含量的检测方法以同位素为内标，使得目标化合物的识别更为准确，同时更好的消除了系统误差，定量结果更为准确。

附图说明

图1为缬氨酸(Val)质荷比特征图。

图2为亮氨酸(Leu)和异亮氨酸(Ile)质荷比特征图。

图3为Val标准品色谱图。

图4为Val内标色谱图。

图5为Leu和Ile标准品色谱图。

图6为Leu内标色谱图。

图7为血清样本中Leu和Ile色谱图。

图8为血清样本中Val色谱图。

图9为血清样本中Leu内标色谱图。

图10为血清样本中Val内标色谱图。

具体实施方式

(一)检测方法

(1)用移液器移取标准品和同位素内标于离心管中，涡旋仪混匀；同时平行移取待测样本和同位素内标涡旋混匀，密封。

(2)高速离心，取部分体积的上清液，吹干，

(3)加入流动相复溶液(含2-8‰全氟代庚酸的乙腈水溶液或甲醇水溶液，有机相的体积百分比含量为20-70％)复溶，超声溶解；离心，取上清液，由液相自动进样器进样，与流动相一起流经色谱柱进入液相色谱-质谱分析，最终定量分析血清中支链氨基酸的含量。

液相色谱条件：

在Discovery C18色谱柱上进行分离，流动相为含2-8‰全氟代庚酸的乙腈水溶液或甲醇水溶液，采用梯度洗脱方式，流速为175μl/min。

串联质谱条件：

质谱采用电喷雾离子源(ESI)、正离子模式、选择反应监测(SRM)进行定量分析。离子源为ESI源，设置喷雾电压为4500V；氩气作为碰撞气体，压力为1.5mTorr(1mTorr＝0.133Pa)，碰撞能量(CE)15V；氮气作为鞘气和辅助气体，设置参数分别为30psi和10psi(1psi＝6.89KPa)；加热毛细管温度350℃；检测方式为正离子模式，扫描模式为SRM，扫描时间为0.5s。

支链氨基酸，包含缬氨酸(Val)，亮氨酸(Leu)，异亮氨酸(Ile)三种氨基酸，其分子结构式如下所示：