[发明专利]检测血清或血纸片中酰基肉碱含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测体血清或血纸片中酰基肉碱含量的方法。

背景技术

脂肪酸氧化代谢病是指脂肪酸进入线粒体途径或脂肪酸在β氧化过程中，由于所需酶的功能障碍导致脂肪酸氧化受阻所导致的一组疾病。这些疾病通常表现为体内某种或多种酰基肉碱含量的升高，如不及时采取人工干预治疗，将会严重影响患者的脏器功能。由于这些疾病缺乏特异的临床表现和常规实验室检查方法，诊断比较困难。

目前对于酰基肉碱的检测，主要依靠将样本经简单处理后，不经过色谱柱的分离，直接进入质谱进行检测，以待测物离子相对于内标离子强度的高低进行定量。该方法简便，但是只能用于大规模的筛查，对于诊断是由于那个或那些酰基肉碱含量升高，不能给出准确的数值和结果。

本发明在用串联质谱相关文献的基础上，对前处理方法和检测方法进行修改，同时检测8种体内酰基肉碱的含量，为临床上诊断由于酶功能障碍导致的脂肪酸氧化受阻导致的疾病提供了有效地检测手段。

发明内容

本发明的目的是提供一种特异性强、准确度和灵敏度高、分析时间短的检测血清或血纸片中酰基肉碱含量的方法。

本发明所提供的检测血清中酰基肉碱含量的方法，包括如下步骤：

标品、待测样本分别和内标溶液混合，加入基质溶液，再加入有机试剂沉淀蛋白，涡旋，高速离心，取上清液，吹干，加入饱和盐酸正丁醇，加热55℃～75℃，反应5min～20min后冷却，吹干；加入流动相复溶液复溶，高速离心后取上清溶液，与流动相一起流经色谱柱进行液相色谱-质谱分析，根据酰基肉碱的特征性色谱-质谱行为，最终测定酰基肉碱的含量。

本发明的检测血清中酰基肉碱含量的方法，其中：所述基质溶液为4％牛血清蛋白溶液。

本发明的检测血清中酰基肉碱含量的方法，其中：所述有机试剂为乙腈或甲醇。

本发明的检测血清中酰基肉碱含量的方法，其中：所述流动相复溶液和流动相均为含1-5‰甲酸或乙酸的甲醇-水溶液或乙腈-水混合溶液。

本发明的检测血清中酰基肉碱含量的方法，其中：所述流动相复溶液中甲醇或乙腈的体积百分比含量为20-80％。

本发明所提供的检测血纸片中酰基肉碱含量的方法，包括如下步骤：

标准品纸片、待测血纸片分别和内标溶液混合，加入有机溶剂提取，涡旋20～60min，高速离心，取上清液，吹干，加入饱和盐酸正丁醇，加热55℃～75℃，反应5min～20min后冷却，吹干；加入流动相复溶液复溶，高速离心后取上清溶液，与流动相一起流经色谱柱进行液相色谱-质谱分析，根据酰基肉碱的特征性色谱-质谱行为，最终测定酰基肉碱的含量。

本发明的检测血纸片中酰基肉碱含量的方法，其中：所述有机提取溶剂为甲醇或乙腈。

本发明的检测血纸片中酰基肉碱含量的方法，其中：所述流动相复溶液和流动相均为含1-5‰甲酸或乙酸的甲醇-水溶液或乙腈-水混合溶液。

本发明的检测血纸片中酰基肉碱含量的方法，其中：所述流动相复溶液中甲醇或乙腈的体积百分比含量为20-80％。

本发明的检测血清及血纸片中酰基肉碱含量的方法，以液相色谱作为分离手段，质谱做为检测手段的新技术，它涵盖了液相色谱的高分离能力与质谱的高灵敏度、高选择性、适用范围广等优点，能够获得稳定的定性定量信息。此方法为特异性强、准确度和灵敏度高、分析时间短为临床上诊断与酰基肉碱代谢相关的疾病提供可靠的实验依据，为遗传代谢病的筛查、产前诊断提供有效地检测手段。本发明的检测血清及血纸片中酰基肉碱含量的方法以同位素为内标，使得目标化合物的识别更为准确，同时更好的消除了系统误差，定量结果更为准确。

附图说明

图1为C2质荷比特征图。

图2为C3质荷比特征图。

图3为C4质荷比特征图。

图4为C5质荷比特征图。

图5为C6质荷比特征图。

图6为C8质荷比特征图。

图7为C14质荷比特征图。

图8为C16质荷比特征图。。

图9为C2标准品色谱图。

图10为C2同位素内标色谱图。

图11为C3标准品色谱图。

图12为C3同位素内标色谱图。

图13为C4标准品色谱图。

图14为C4同位素内标色谱图。

图15为C5标准品色谱图。

图16为C5同位素内标色谱图。

图17为C6标准品色谱图。

图18为C8标准品色谱图。