[发明专利]抗H3N2猪流感病毒血凝素蛋白单克隆抗体，杂交瘤细胞株及抗原捕获ELISA试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于免疫学领域，具体涉及一种抗H3N2猪流感病毒血凝素蛋白单克隆抗体，杂交瘤细胞株及其抗原捕获ELISA试剂盒。

背景技术

猪流感(swine influenza，SI)是甲型(A型)流感病毒引起的猪或人的一种急性、人畜共患呼吸道传染性疾病。属于正粘病毒科、A(甲)型流感病毒属，为单股负链RNA病毒，基因组约为13.6kb，由大小不等的8个独立片段组成。A型流感病毒包含有16种血球凝集素蛋白(H1-H16)和9种神经氨(糖)酸苷酶蛋白(N1-N9)。目前最常见的亚型是H1N1，H1N2和H3N2，全世界很多新的病毒变种和亚型还在不断地被发现中。

猪流感的临床症状为体温突然升高(40-45℃)。猪流感能造成急性上呼吸道感染，典型特征是发热、嗜睡、厌食、体重减轻、呼吸困难，以及流涕、喷嚏、结膜炎，后期有咳嗽，有时还会出现流产。猪流感可继发细菌或病毒感染，严重时可导致呼吸衰竭(WorldOrganization for Animal Health[OIE].Manual of diagnostic tests and vaccines for terrestrialanimals[online]Paris；OIE；2008.Swineinfluenza.Availableat：http://www.oie.int/eng/normes/mmanual/2008/df/2.08.08_SWINE_INFLUENZA.pdf.Accessed 7 Jan 2008)。某些毒株感染后，猪仅有轻微的或没有临床症状，发病率很高但死亡率低于1％-4％(Acha PN，Szyfres B(Pan American Health Organization[PAHO]).Zoonoses and communicable diseases common toman and animals.Volume 2.Chlamydiosis，rickettsioses and viroses.3rd ed.Washington DC：PAHO；2003.Scientific and Technical Publication No.580.Influenza；p.155-72)。此外，猪流感病毒也是猪免疫抑制的主要诱因之一，猪群感染猪流感病毒可引起猪繁殖能力减退，育肥猪增重减慢等(Choi Y K，Goyal S M，Joo H S.Prevalence of swine influenza virus subtypeson swine farms in the united states[J].Arch Virol，2002，147：1209-1220)。猪流感不仅给养猪业造成重大经济损失，还对人类健康造成威胁，因此研究快速、敏感、准确的猪流感诊断产品，具有重要的经济价值和公共卫生意义。

血清学调查和毒株监测研究发现，1999～2003年间我国东北、西北、华中、华东、华南及西南地区等20个省、市猪群大范围存在H3亚型流感病毒感染(李海燕，于康震，辛晓光，等.部分省市猪流感的血清学调查及猪流感病毒的分离与鉴定[J]动物医学进展，2003，24(3)：67-72)，Sreta等研究了H1N1和H3N2亚型(泰国分离株)对断奶乳猪仔猪的致病力，发现这2种亚型均可诱导流感样症状和肺损伤(SRETAD，KEDKOVlD R，TUAMsANG S，etal.Patbogenesis of swine influenza rims(nlai isolates)in weanling pigs：an experimentaltrial[J]Virol J.2009.6(1)：34)，此病一旦暴发流行，很难将其控制和根除，因此及时准确地检测出SIV，对预防和控制猪流感暴发流行具有重大意义。

猪流感病毒抗原检测方法较多，到目前为止，国际上通用的猪流感抗原检测方法有鸡胚分离、荧光RT-PCR、RT-PCR等。病毒分离耗时长，同时存在生物安全隐患；RT-PCR和荧光RT-PCR方法对检测设备和人员专业知识要求较高、成本大，难以在普通实验室和基层开展，因此，研制一种直接检测样品中H3N2猪流感病毒的快速、便捷、适合现场使用的检测试剂盒具有很强的实用价值和广阔的应用前景，对猪流感的防控具有重要意义。

本发明制备了H3N2猪流感病毒血凝素蛋白的单克隆抗体，并以此单克隆抗体为基础，建立起具有高度敏感性和特异性、操作简单的ELISA检测方法。该方法能快速、经济、高通量检测样品中H3N2猪流感病毒。

发明内容