[发明专利]灵敏的检测配方奶粉中三聚氰胺的毛细管电泳方法

权利要求书

1.场放大进样-区带毛细管电泳条件下测定配方奶粉中的三聚氰胺的方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)将三聚氰胺标准品溶解在20％甲醇水溶液中，配制成浓度为2.000g/L的储备液。避光4℃保存。使用时根据需要稀释成不同浓度的标准液。在普通的区带毛细管电泳(CZE)和场放大进样联用CZE(FASS-CZE)的模式下，在最佳检测条件下，对三聚氰胺的标准品进行毛细管电泳分析。得到标准谱图。

(2)采用CZE和FASS-sweep MEKC方法在最佳检测条件下，对样品的提取液进行分析，获得样品的毛细管电泳图。

(3)根据三聚氰胺的校正曲线方程，计算出步骤(2)中样品中三聚氰胺的含量。

所述最佳检测条件为：

CZE电泳条件：压力进样3kPa，进样时间15s，运行缓冲液：20mmol/L磷酸二氢钠(pH 2.2)-10％(体积分数)甲醇，三聚氰胺溶液(8mg/L)配制在运行缓冲液中。

权利要求1所述的FASS-CZE方法：FASS-CZE电泳条件：首先在毛细管内充满运行缓冲液，然后在毛细管中加压注入一段水柱(40％乙腈)(200s，3kPa)，样品采用电动进样(80s，20kV)，运行缓冲液组成为120mmol/LNaH₂PO₄缓冲液(pH 2.2)-10％(体积分数)甲醇；分离电压20kV，样品基质为0.1mmol/LNaH₂PO₄(pH 2.2)-20％乙腈；测量波长230nm；样品(2mg/L)配制在样品基质中。

根据权利要求1，步骤(2)中配方奶粉中三聚氰胺的样品预处理过程按照以下步骤进行：分别称取2.000g配方奶粉，加3mL乙腈，超声10min，以7000r/min离心6min，吸出上清液，在下层沉渣中再加3mL乙腈，操作方法同上，反复提取三次，合并上清液，并将其放入冰箱内冷冻5min，取出后用普通滤纸过滤，然后用0.45μm过滤膜过滤得样品溶液。所有溶液进入毛细管前均经过0.45μm过滤膜过滤，经超声脱气后使用。

根据权利要求1所述FASS-CZE测定配方奶粉中的三聚氰胺的方法，其特征在于：在最佳的富集检测条件下，FASS-CZE检测三聚氰胺的富集倍数比CZE提高了700倍，方法的线性范围分别为5-500μg/L，检出限为2.8μg/kg(S/N＝3)，FASS-CZE日内迁移时间和峰面积的相对标准偏差(RSD)分别小于5.2％，4.5％，日间精密度分别为8.7％和5.3％。

2.场放大进样-胶束扫集毛细管电泳条件下测定配方奶粉中三聚氰胺的方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)将三聚氰胺标准品溶解在20％甲醇水溶液中，配制成浓度为2.000g/L的储备液。避光4℃保存。使用时根据需要稀释成不同浓度的标准液。在场放大进样联用胶束扫集(FASS-sweep MEKC)的模式下，在最佳检测条件下，对三聚氰胺的标准品进行毛细管电泳分析。得到标准谱图。

(2)FASS-sweep MEKC方法在最佳检测条件下，对样品的提取液进行分析，获得样品的毛细管电泳图。

(3)根据三聚氰胺的校正曲线方程，计算出步骤(2)中样品中三聚氰胺的含量。

权利要求2所述的FASS-sweep MEKC方法：首先在毛细管内充满运行缓冲液，然后在毛细管中加压注入一段水柱(30s，P＝3kPa)，样品采用电动进样(60s，20kV)，水柱提供的高电场使样品快速向出口端迁移，样品离子迁移到水和背景缓冲液的界面，背景电解质提供低电场使样品离子的迁移速度降低，从而在界面处形成一段样品区带。进样完毕后进出口端均换上低pH胶束背景电解质，在负压下，运用胶束扫集样品区带，使样品区带更窄。样品基质为：0.1mmol/LNaH₂PO₄(pH 2.2)-20％乙腈。三聚氰胺溶液(1.5mg/L)配制在样品基质中。运行缓冲液组成：90mmol/L SDS、20mmol/LNaH₂PO₄(pH 2.2)、10％甲醇(v/v)为运行缓冲溶液。分离电压反向20kV，测量波长230nm。

根据权利要求2所述场放大进样-胶束扫集毛细管电泳条件下测定配方奶粉中三聚氰胺的方法的，其特征在于：步骤(2)中配方奶粉中三聚氰胺的样品预处理过程按照以下步骤进行：分别称取2.000g配方奶粉，加3mL乙腈，超声10min，以7000r/min离心6min，吸出上清液，在下层沉渣中再加3mL乙腈，操作方法同上，反复提取三次，合并上清液，并将其放入冰箱内冷冻5min，取出后用普通滤纸过滤，然后用0.45μm过滤膜过滤得样品溶液。所有溶液进入毛细管前均经过0.45μm过滤膜过滤，经超声脱气后使用。

根据权利要求2所述的一种高灵敏度的毛细管电泳在线富集方法测定配方奶粉中的三聚氰胺的方法，其特征在于：对毛细管进行如下处理：

毛细管在使用时，分别用0.1mol/L HCl、超纯水、0.1mol/LNaOH、超纯水、电泳缓冲液冲洗10min。两次样品分析运行期间，分别用0.1mol/L NaOH、超纯水、电泳缓冲液冲洗5min，以获得良好的分离检测重现性。

根据权利要求2所述FASS-sweep MEKC测定配方奶粉中的三聚氰胺的方法，其特征在于：在最佳的富集检测条件下，FASS-sweep MEKC检测三聚氰胺的富集倍数比CZE提高了1130倍。方法的线性范围为5-1000μg/L，检出限为1.8μg/kg(S/N＝3)，FASS-sweep MEKC迁移时间和峰面积的相对标准偏差(RSD)分别小于5.2％和3.7％，日间精密度分别为10％和6.3％。