[发明专利]组氨酸-脯氨酸环二肽的液相合成法

权利要求书

1.组氨酸-脯氨酸环二肽的制备方法，其包括如下步骤：

（1） 通过二碳酸二叔丁酯与组氨酸的反应得到N(im)-叔丁氧羰基-N(α)-叔丁氧羰基-L-组氨酸；

（2） N(im)-叔丁氧羰基-N(α)-叔丁氧羰基-L-组氨酸与L-脯氨酰胺反应得到N(im)-叔丁氧羰基-N(α)-叔丁氧羰基-L-组氨酸-L-脯氨酰胺线性二肽；

（3） N(im)-叔丁氧羰基-N(α)-叔丁氧羰基-L-组氨酸-L-脯氨酰胺线性二肽经过脱保护、环合反应得到组氨酸-脯氨酸环二肽。

2.如权利要求1所述的组氨酸-脯氨酸环二肽的制备方法，其特征在于：取15克～25克L-组氨酸悬浮于35～70毫升水中，然后加入70～140毫升的四氢呋喃；在-5℃～5℃条件下，加入50～60克二碳酸二叔丁酯；然后在-5℃～5℃条件下，以0.10～0.20ml/min的速度滴加35～70毫升的10%～20%碳酸钾水溶液，边滴加边搅拌，滴加完毕，继续搅拌20～50分钟；自然升温至室温，反应12～24小时；减压去除四氢呋喃，水相用40～80毫升乙醚提取两次，然后用70～140毫升饱和硫酸氢钾溶液调节pH＝1～5；将此反应液用乙酸乙酯提取三次，合并提取液，加无水硫酸镁干燥，减压除去乙酸乙酯，即得到N(im)-叔丁氧羰基-N(α)-叔丁氧羰基-L-组氨酸白色粉末。

3.如权利要求1所述的组氨酸-脯氨酸环二肽的制备方法，其特征在于：取30克～40克得到的N(im)-叔丁氧羰基-N(α)-叔丁氧羰基-L-组氨酸悬浮于150～300毫升四氢呋喃中，加入15～25克N,N'-羰基二咪唑，搅拌使其全部溶解；搅拌反应20～40分钟后，在-5℃～5℃条件下加入10～20克的L-脯氨酰胺，加完后，继续搅拌20～50分钟，自然升温至室温，反应12～24小时；减压去除四氢呋喃，将水相用40～80毫升乙酸乙酯提取五次，合并提取液，然后用0.3%～0.6%（v/v）的浓盐酸/饱和食盐水溶液75毫升～150毫升洗涤五次，有机相中加无水硫酸镁干燥，减压除去乙酸乙酯，即得到N(im)-叔丁氧羰基-N(α)-叔丁氧羰基-L-组氨酸-L-脯氨酰胺线性二肽粉末。

4.如权利要求1所述的组氨酸-脯氨酸环二肽的制备方法，其特征在于：将N(im)-叔丁氧羰基-N(α)-叔丁氧羰基-L-组氨酸-L-脯氨酰胺线性二肽分散于30毫升～60毫升水中，升温搅拌，在95℃～105℃条件下，滴加浓盐酸调节pH＝3～7，保温反应10～20小时，HPLC监测原料消耗完毕后，加入活性炭0.5克～5.0克保温搅拌1～3小时，然后热过滤，减压浓缩，甲醇溶解，分散于冰乙醚中，过滤后得到组氨酸-脯氨酸环二肽产品。