[发明专利]逆转双向洗脱pH-区带精制逆流色谱法分离生物碱的方法

权利要求书

1.一种采用逆转双向的pH-区带精制逆流色谱法从总生物碱中分离纯化生物碱的方法，包括：配制流动相和固定相，将总生物碱溶于流动相和固定相的混合溶剂中，使逆流色谱仪柱子中充满固定相，由进样阀进样，再将流动相泵入柱子中，进行分离，其特征是：在完成上述过程后，当目标成分尚未流出被洗脱出柱子时交换流动相和固定相，并改变逆流色谱仪的转动方向，收集流分，即得。

2.权利要求2的方法，包括：配制两相溶剂：将水和选自正己烷、石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、甲醇中的两～三个溶剂混合，上相加入三乙胺为流动相，下相加入盐酸为固定相，将总生物碱溶于两相混合溶剂中，用下相溶剂填充逆流色谱柱，顺时针转动主机，通过进样阀进样，从逆流色谱柱首端泵入上相，200-250分钟后，停止泵入上相，改为将下相以同流速从尾端泵入逆流色谱柱，同时将主机转动方向调整为逆时针转动，每3-5分钟或根据流分的紫外吸收及pH变化在色谱柱的首端接收目标成分。

3.一种采用逆转双向的pH-区带精制逆流色谱法从洋金花总生物碱中分离纯化东莨菪碱和阿托品的方法，包括：配制两相溶剂：乙酸乙酯∶正丁醇∶水体积比＝3.8-4.2∶0.8-1.2∶4.8-5.2，上相加入三乙胺为流动相，下相加入盐酸为固定相，将洋金花总生物碱溶于两相混合溶剂中，用下相溶剂填充逆流色谱柱，顺时针转动主机，通过进样阀进样，从逆流色谱柱首端泵入上相，200-250分钟后，停止泵入上相，改为将下相以同流速从尾端泵入逆流色谱柱，同时将主机转动方向调整为逆时针转动，每3-5分钟或根据流分的pH变化在色谱柱的首端接收目标成分。

4.权利要求3的方法，其中洋金花总生物碱是将洋金花经乙醇提取，CH₂Cl₂萃取后得到。

5.一种采用pH-区带精制逆流色谱法从黄连总生物碱中分离纯化黄连碱、药根碱、非洲防己碱、表小檗碱和木兰碱的方法，包括：配制两相溶剂：正己烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶水体积比＝0.8-1.2∶4.8-5.2∶0.8-1.2∶4.8-5.2，上相加入三乙胺为流动相，下相加入盐酸为固定相，将黄连总生物碱溶于两相混合溶剂中，用下相溶剂填充逆流色谱柱，顺时针转动主机，通过进样阀进样，从逆流色谱柱首端泵入上相，200-250分钟后，停止泵入上相，改为将下相以同流速从尾端泵入逆流色谱柱，同时将主机转动方向调整为逆时针转动，根据流分的紫外吸收或pH变化在色谱柱的首端接收目标成分。

6.权利要求5的方法，其中黄连总生物碱是将黄连药材经乙醇提取，所得浸膏酸水溶解CH2Cl2萃取后得到。

7.权利要求2、3或5的方法，其中主机转速为800-900rpm。

8.权利要求2、3或5的方法，其中泵入流速为0.8-1.5mL/min。

9.权利要求2、3或5的方法，其中三乙胺加入A相后的浓度为1.6％-0.50％，盐酸加入B相后的浓度为0.80％-0.15％，为体积百分比。