[发明专利]一种H1N1猪流感病毒血凝素模拟抗原表位及其应用

说明书

技术领域

本发明属于分子免疫学技术领域，涉及一种能模拟H1N1猪流感病毒血凝素抗原表位的12肽及其在制备H1N1猪流感病毒抗体检测试剂上的应用。

背景技术

流感病毒(Influenza virus)属正粘液病毒科，流感病毒属，为单股负链RNA病毒，由大小不等的8个独立片段组成。根据病毒抗原特性及其基因特性的不同，流感病毒分为甲、乙、丙三型。甲型流感病毒根据血凝素(H)和神经酰胺酶(N)的不同又分为许多亚型，H可分为15个亚型(H1～H16)，N有9个亚型(N1～N9)，其中感染人和猪的主要是A型流感病毒H1N1、H2N2、H3N2。已有研究表明，猪能感染多种流感病毒，是流感病毒的“混合器”。2009年甲型H1N1流感病毒在人际间大规模流行，对人类健康构成严重威胁。遗传分析显示，这个病毒就含有猪流感的基因成分(Transmission and Reassortment of Pandemic H1N1/2009Influenza A Virus in Swine.D.Vijaykrishna，et al，SCIENCE VOL 328 18JUNE 2010)。HIN1亚型引起的猪流感已有近百年历史，1918年美国首次报道，1930年Shope从猪体中首次分离到H1N1亚型猪流感病毒，即A/Swine/Iowa/30(H1N1)。猪流感病毒(Swine influenza virus，SIV)基因组大约为13.6kb，其中血凝素(hemagglutinin，HA)基因在流感病毒传染的过程中与识别靶细胞表面受体在穿膜过程中起重要作用，刺激机体产生的中和抗体可以抵抗病毒感染。目前H1N1猪流感病毒的实验室诊断主要基于核酸RT-PCR和荧光定量RT-PCR，缺乏简便特异的免疫学诊断方法。因此，研制抗体检测相关试剂，对H1N1型流感病毒的研究、诊断、治疗及控制具有重要意义。

免疫学研究表明，引起免疫应答的主要成份是蛋白抗原，而起决定作用的又是蛋白抗原上的抗原决定簇即抗原表位。血凝素(hemagglutinin，HA)是流感病毒的主要外膜蛋白，是流感病毒最重要的蛋白抗原之一。HA具有免疫原性，能使人体产生保护性抗体，但其容易变异，是流感流行的主要原因之一，也是流感病毒检测的靶标之一。随着人们越来越对H1N1猪流感病毒的关注，H1N1猪流感病毒血凝素抗原表位的获得和应用也成为研究焦点。由于基因工程技术和免疫学的发展，人们能够鉴定抗原表位，并且可对其氨基酸序列进行分析研究，使得抗原表位的获得成为可能。

噬菌体展示技术是一项十九世纪初发展起来的新的基因操作技术，它将外源多肽或蛋白与噬菌体的衣壳蛋白融合表达，融合蛋白展示在病毒颗粒的表面，而编码该融合子的DNA则位于病毒粒子内。使大量多肽与其DNA编码序列之间建立了直接联系，使各种靶分子(抗体、酶、细胞表面受体等)的多肽配体通过淘选得以快速鉴定(Identification and Charaterization of Peptides Mimicking theEpitopes of Metal loprotease of Schistosoma Japonicum，CMI，2005，2(3))。从噬菌体随机肽库中筛选抗原表位的基本原理是生物淘选，可使用纯化的单克隆抗体、阳性血清IgG或重组表达蛋白为靶分子进行淘选，可以筛选出与原始抗原序列完全相同的线性表位抗原，也能筛选出与原始抗原序列不完全相同但功能相似的构象表位抗原，即模拟表位抗原(Schistosoma japonicum：Isolation andIdentification of Peptides Mimicking Ferritin Epitopes from Phage Display Library.ActaBiochimica et Biophysica Sinica.2004，36(3))。

发明内容

本发明的目的是筛选一种H1N1猪流感病毒血凝素模拟抗原表位。

本发明的另一个目的是提供上述H1N1猪流感病毒血凝素模拟抗原表位在制备H1N1猪流感病毒血清学诊断试剂中的应用，使得H1N1猪流感的检测更加快速，简便和准确。

一种H1N1猪流感病毒血凝素模拟抗原表位，是由12个氨基酸残基构成的短肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示：

SEQ ID NO：1：Gly-Leu-Leu-Arg-Ser-Leu-Thr-Tyr-Glu-Ala-Val-Arg。