[发明专利]一种LED条件下草莓脱毒组培方法

权利要求书

1.一种LED条件下草莓脱毒组培方法，其特征在于：按如下步骤进行：

1)、培养条件的选择，以LED作为组培光源，LED中的红光630±20nm与蓝光460±20nm的比例为2～5∶1～2，光照光强为1500～2000Lx，光照时间为12～16h/d，培养温度为25±2℃；

2)、培养基的配制，包括基本培养基和组培各阶段培养基的各组分与每升所含重量为：

(1)基本培养基：诱导、增殖、壮苗培养基用MS基本培养基；生根培养基用1/2MS基本培养基；其中，蔗糖或白糖20～40g/L，琼脂7～9g/L，pH 5.6～5.8；

(2)诱导培养基：MS+BA0.1～2.0mg/L+NAA0.01～0.5mg/L；

(3)增殖培养基：MS+BA 0.1～2.0mg/L+NAA 0.01～0.5mg/L；

(4)壮苗培养基：MS+BA0.1～1.0mg/L+NAA0.01～0.25mg/L；

(5)生根培养基：1/2MS+IBA0.1～1.0mg/L；

3)、草莓茎尖脱毒组培培养：

(1)外植体的选取与灭菌：取温室栽培或大田栽培的性状纯正、生长健壮的草莓植株上的匍匐茎，经灭菌处理后作为茎尖脱毒培养用的外植体；

(2)茎尖脱毒培养：将灭菌处理后的匍匐茎顶芽在无菌条件下，在40倍的双筒解剖镜下，摘出0.2～0.3mm大小的带1～2个叶原基的茎尖，接种在诱导培养基上，在培养条件下培养30～45天后，从茎尖诱导形成幼芽或丛生芽；

(3)增殖培养：将诱导形成的幼芽或丛生芽切成单芽接到增殖培养基上，在培养条件下培养30～45天增殖出丛生芽；根据对幼苗数量的需求，每隔30～45天按同样方法进行幼苗再增殖培养；

(4)壮苗培养：将增殖出的丛生芽接种到壮苗培养基上，在培养条件下培养20～30天后，幼苗株高生长达3～5厘米；

(5)生根培养：将培养的壮苗切成单株接种在生根培养基中进行生根培养，在培养条件下培养20～30天后，幼苗长高成约5～7cm、苗基部长出5～10根细根；

(6)移栽：在隔离温室中，将生根组培苗移栽于基质中，培育1～2个月至成脱毒组培苗；

4)、病毒ELISA检测：

将常规栽培中发生的草莓病毒，经扩增、克隆和原核表达所获得的相关病毒外壳蛋白，制备成病毒特异性抗血清后，对脱毒组培苗进行病毒ELISA检测；或通过购买抗血清试剂盒或通过细胞制备的抗血清或委托其他单位对脱毒组培苗进行病毒ELISA检测。

2.根据权利要求1所述的LED条件下草莓脱毒组培方法，其特征在于：所述培养条件，以LED作为组培光源，LED中的红光与蓝光的比例为3∶1，光照光强为2000Lx，光照时间为16h/d，培养温度为25±2℃。

3.根据权利要求1所述的LED条件下草莓脱毒组培方法，其特征在于：所述培养基的配制，包括基本培养基和组培各阶段培养基的各组分与每升所含重量为：

(1)基本培养基：诱导、增殖、壮苗培养基用MS基本培养基；生根培养基用1/2MS

基本培养基；其中，蔗糖或白糖20～40g/L，琼脂7～9g/L，pH 5.6～5.8；

(2)诱导培养基：MS+BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L；

(3)增殖培养基：MS+BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L；

(4)壮苗培养基：MS+BA0.1mg/L+NAA0.05mg/L；

(5)生根培养基：1/2MS+IBA0.5mg/L。

4.根据权利要求1所述的LED条件下草莓脱毒组培方法，其特征在于：所述的灭菌处理是将外植体用体积比为75％的酒精表面消毒30～45秒，无菌水冲洗3遍，然后用体积比为2％次氯酸钠溶液振荡灭菌10～15分钟，无菌水洗3～5遍。

5.根据权利要求1所述的LED条件下草莓脱毒组培方法，其特征在于：所述的移栽基质由泥炭∶珍珠岩∶蛭石按体积比3∶2∶1配制而成。