[发明专利]一种低成本培养基工业化生产溶藻菌的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于环保技术领域，更具体涉及一种低成本培养基规模化生产溶藻菌的制备方法。适宜工业化生产，溶藻菌适用于在富营养化水体中控制蓝藻（主要是微囊藻）水华的爆发。 

背景技术

蓝藻是地球上最早出现的光合自养生物，在长期的进化过程中，这类生物发展了一套独特的形态和生理生化机制，能够在各种不同生境中生衍，使其具有一定的竞争优势。在环境条件适宜时，某些蓝藻能快速生长，当达到一定生物量时，微囊藻在水体表层大量聚集，形成肉眼可见的藻类聚集物，即蓝藻（微囊藻）水华。蓝藻水华引起的一系列环境和健康问题，正受到全世界各国的高度重视。藻类过度繁殖是导致湖泊水环境恶化的关键环节,有害藻类的过度增殖,尤其产毒素蓝藻给人类健康构成了潜在的威胁。针对我国湖泊面临的严重富营养化及其灾害问题,在湖内污染源、流域点源与面源污染控制需要投入巨大资金且短期内难以取得成效的情况下,探索浮游藻类生物量的控制、抑制“水华”发生、改善湖泊水质的有效途径是非常必要的。藻类的控制技术可归结为物理方法、化学方法和生物方法。物理方法主要是电磁场、机械除藻等,可作为蓝藻水华控制的辅助性措施,但处理能力有限,局限于水处理工程应用。化学除藻的方法主要包括施用除草剂、杀藻剂及金属盐等。化学药剂除藻技术虽有快速高效的优点,但会带来水体的二次污染问题,直接在作为饮用水源的湖泊、水库等的应用受到限制或必须慎用。生物学控藻技术是利用藻类的天敌及其产生的生长抑制物质对藻类的生长、繁殖进行抑制,从而达到控制藻类数量、防治富营养化带来的各种危害,目前正处在研究发展的初期阶段。溶藻细菌(algae-lysing bacteria) ,作为水生生态系统生物种群结构和功能的重要组成部分,对维持藻的生物量平衡具有非常重要的作用。溶藻细菌,作为水华防治的生物,已经引起越来越多人的关注。然而，培养溶藻菌的主要营养成分为硝酸钠，磷酸氢二钾，硫酸镁，氯化钙, 柠檬酸, 柠檬酸铁铵, 乙二胺四乙酸, 碳酸钠, A₅ + Co Solution （A5溶液）大豆胰蛋白等（见ZL ZL2004100129324“一种肠杆菌及制备方法和应用”），这些原料，尤其是大豆胰蛋白成本较高，难用于大规模生产，给溶藻菌的应用带来了一定的困难。本发明采用1/2体积的豆腐水进行培养，原料来源容易，生产成本低廉，且易于培养，适宜工业化生产，从而达到控制富营养化湖泊蓝藻水华发生的目的。

发明内容

    本发明的目的是在于提供了一种低成本培养基工业化生产溶藻菌的制备方法。方法易行，操作简便，在于降低了富营养化水体，控制了蓝藻水华爆发。该方法原料来源容易，生产成本低廉，且易于培养，适宜工厂化的生产。

为了达到上述的目的，本发明采取以下技术措施：

本发明采用（新鲜未稀释豆腐水与井水的体积比）1/2体积的豆腐水为原料，适当添加少量营养元素（N、P、K、Ca、Mg、具体用量见配制培养基）进行溶藻菌培养。其主要技术措施如下：

   溶藻菌菌种来源：

溶藻菌为专利菌种（专利号：ZL2004100129324，菌种名为：肠杆菌；拉丁文是Enterobacteriaceae .sp，保藏在武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏号为M204010。）该溶藻菌能在市场中买到。

 一种低成本培养基工业化生产溶藻菌的制备方法，其步骤是：

    其技术构思是：A、配制溶藻菌Ⅰ、溶藻菌Ⅱ菌种培养基；  B、 溶藻菌Ⅰ、溶藻菌Ⅱ菌种的培养；C、 Ⅲ级溶藻菌种子（母液扩大）规模化生产培养。

A、溶藻菌Ⅰ、溶藻菌Ⅱ菌种培养基：

① 配制培养基：硝酸钠100-110mg，磷酸氢二钾3-4mg，硫酸镁7-8mg，氯化钙3-4mg , 柠檬酸0.5-0.6mg, 柠檬酸铁铵0.5-0.7mg, 乙二胺四乙酸0.5-0.7mg, 碳酸钠1-3mg，A5 + Co Solution（A5溶液）0.1-0.3ml, 蒸馏水Distilled water99.9 ml，5-6 g/升大豆胰蛋白，混合溶解后可得培养基。培养基pH7.6。

② 灭菌： 培养基配制好后采用高压蒸汽灭菌，当蒸汽压力达到1.05kg/cm²时，水蒸气的温度升高到121℃，经15～30min灭菌结束，培养基降到20～25℃后，即可进行接种。接种应在无菌室内的超净工作台上进行，接种前将无菌室内和超净工作台内的紫外灯同时打开，灭菌1h。试管、平板和三角瓶接种应在超净工作台上分别按斜面接种、平板划线和液体培养接种法进行接种。