[发明专利]蝎活性多肽及其制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体的说是涉及蝎活性多肽及其制备方法与应用。

背景技术

自身免疫性疾病(autoimmune disease)是机体对自身抗原发生免疫反应而导致自身组织损害所引起的疾病，即人体免疫系统攻击自身的组织。全球约有5～8％的人口受到约40多种自身免疫性疾病的威胁，包括T细胞介导的类风湿性关节炎、多发性硬化症、系统性红斑狼疮、白塞病、自身免疫性甲状腺病和I型糖尿病等。在类风湿性关节炎中免疫系统攻击病患的关节部位，多发性硬化症是神经细胞的神精髓鞘(myelin sheaths)受到攻击。这些疾病涉及全身一种或多种组织和器官，严重影响人体健康及生命。针对自身免疫性疾病，目前无有效疗法，且病情反复发作。目前常用对抗自体免疫性疾病的方法，一是利用类固醇来减缓因免疫系统攻击组织所造成的炎症反应，二是使用免疫抑制药物，抑制免疫系统的作用，但这两种方法都会造成严重的副作用，而且都只能减缓病情的发展速度，不能根治疾病。为了改变自身免疫性疾病药物治疗的落后现状，急需探索新的疾病预防和治疗方法。

原态( )T细胞被特异性的抗原物质激活后，进行增殖和分化，一般形成在功能上各异的两类细胞，即效应型记忆T细胞(effector memory，TEM)和中央型记忆T细胞(central memory，TCM)。在人体T细胞膜上存在两种钾通道，一种是电压门控钾通道Kv1.3，另一种是中等电导钙激活钾通道IKCa1。近年来，研究发现钾通道Kv1.3在不同类型T细胞上具有显著的时空表达差异性，当T细胞被激活后，只有发挥免疫功能的TEM细胞可显著地表达1500～2000个Kv1.3钾通道。这种钾通道Kv1.3高表达情况相继在患不同自身免疫性疾病的病人的TEM细胞中得到证实。因此，T细胞膜上钾通道Kv1.3给治疗自身免疫性疾病带来新的希望[J.Clin.Invest.，2003，111：1703；Immunity，2008，29：602]。

有机小分子药物首先受到更多的关注。如Merck公司、澳大利亚Walter andEliza Hall药物研发中心、美国加利福尼亚大学等机构筛选、分离、合成、改造和鉴定了大量的有机小分子药物候选物[Mol.Pharmacol，2004，65：1364；Journal of Medicinal Chemistry，2006，49(4)：1433；Mol.Pharmacol，2005，68：1254]。但有机小分子候选药物几乎均作用钾通道Kv1.3和其它相似钾通道，因而极可能造成作用较强的毒副反应，如有机小分子药物作用同源Kv1.1、Kv1.2、Kv1.4、Kv1.5等活性比Kv1.3通道低2～70倍。由于筛选设计有机小分子候选药物具有巨大的挑战性，筛选设计多肽将成为新的趋势。

中国传统医药常用“以毒攻毒”的策略治疗人类的疑难杂症，有毒动物，如蝎、蛇、蜘蛛、蟾蜍、蜈蚣等是首选。现代研究已表明这些有毒动物的毒液中富含动物活性多肽，这些多肽可特异性作用细胞膜上离子通道。当今，这些动物活性多肽已成为全球竞争研发的重要药物资源[Nat.Rev.Drug.Discov.20032：63]。

发明内容

本发明目的是提供稳定的治疗自身免疫性疾病的蝎活性多肽。

为实现本发明的目的，本发明采用如下技术方案：

本发明通过筛选我国蝎活性多肽基因库，得到了许多具有重要药用前景的多肽基因，通过已建立的计算机辅助筛选与设计技术[Biophysical Journal，2004，87：105；Proteins，2008，70：744；Journal of Proteome Research，2010，9：3118]，虚拟筛选到3个可能特异性作用钾通道Kv1.3的蝎活性肽新基因。通过基因工程技术，获得了三种蝎活性多肽，这三种蝎活性多肽分子内均含有3对二硫键，在体外稳定性强，易于长期保存。根据蝎活性多肽在分类学上的结构特征，三者属于同一亚型的α-KTX家族，且都作用于钾通道Kv1.3。

在一个实施方案中，本发明提供了具有如SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的蝎活性肽，命名为ADMR-011。

在一个实施方案中，本发明提供了具有如SEQ ID NO：2所示氨基酸序列的蝎活性多肽，命名为ADMR-016。

在另一个实施方案中，本发明提供了具有如SEQ ID NO：3所示氨基酸序列 的蝎活性多肽，命名为ADMR-019。