[发明专利]一种基于可视芯片的检测食品过敏原的方法

权利要求书

1.一种检测样品中多个过敏原的检测方法，包括：

(1)制备可视薄膜传感器芯片，其中在同一个芯片基质表面上分别固定对应于多个过敏原DNA序列的多个特异性探针；

(2)利用对应于多个过敏原DNA序列的多对特异性上游引物和下游引物对检测样品的DNA序列进行多重PCR扩增，其中下游引物的5’端带有共价结合的生物素；

(3)将步骤(2)的PCR扩增产物与可视化芯片上的探针进行杂交，并洗涤；

(4)用辣根过氧化酶标记的生物素抗体与芯片进行杂交，并洗脱未杂交的链；

(5)用辣根过氧化物酶的底物对芯片进行处理和显色；

(6)根据是否产生可视信号以及产生的可视信号对应的探针位置，确定检测样品中是否含有过敏原以及含有过敏原的种类。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(1)中的可视薄膜传感器芯片的基质表面上还固定有阳性对照序列，所述阳性对照序列的3’端带有共价结合的生物素；所述阳性对照序列优选为SEQ ID NO：25。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(1)中，在同一个芯片基质表面上所固定的对应于每个过敏原DNA序列的特异性探针至少有两个。

4.根据权利要求1-3中任一所述的检测方法，其特征在于，所述多个过敏原选自于小麦、花生、大豆、腰果、牛奶、鸡蛋、鱼和甲壳类中的多种。

5.根据权利要求1-3中任一所述的检测方法，其特征在于，所述多个过敏原为大豆、花生、小麦、腰果，所使用的分别对应于大豆、花生、小麦、腰果过敏原DNA序列的多个特异性探针分别为SEQ ID NO：3、6、9、12，对应于大豆、花生、小麦、腰果过敏原DNA序列的特异性上游引物和下游引物分别为SEQ ID NO：1-2、4-5、7-8、10-11；鸡蛋、牛奶、鱼和虾，所使用的分别对应于鸡蛋、牛奶、鱼和虾过敏原DNA序列的多个特异性探针分别为SEQ ID NO：15、18、21、24，分别对应于鸡蛋、牛奶、鱼和虾过敏原DNA序列的特异性上游引物和下游引物分别为SEQ ID NO：13-14、16-17、19-20、22-23；或者大豆、花生、小麦、腰果、鸡蛋、牛奶、鱼和虾，分别对应于该8种过敏原DNA序列的8种特异性探针为：SEQ ID NO：3、6、9、12、15、18、21、24，利用对应于所述8种过敏原DNA序列的8对特异性上游引物和下游引物：SEQ ID NO：1-2、4-5、7-8、10-11、13-14、16-17、19-20、22-23对检测样品的DNA序列进行多重PCR扩增。

6.一种用于检测样品中过敏原的可视薄膜传感器芯片，其中在同一个芯片基质表面上分别固定对应于多个过敏原DNA序列的多个特异性探针。

7.根据权利要求6所述的可视薄膜传感器芯片，其特征在于，所述可视薄膜传感器芯片的基质表面上还固定有阳性对照序列，所述阳性对照序列的3’端带有共价结合的生物素。

8.根据权利要求6所述的可视薄膜传感器芯片，其特征在于，在同一个芯片基质表面上所固定的对应于每个过敏原DNA序列的特异性探针至少有两个。

9.根据权利要求6-8中任一所述的可视薄膜传感器芯片，其特征在于，所述多个过敏原选自于小麦、花生、大豆、腰果、牛奶、鸡蛋、鱼和甲壳类中的多种。

10.根据权利要求6-8中任一所述的可视薄膜传感器芯片，其特征在于，所述多个过敏原为大豆、花生、小麦、腰果，所使用的分别对应于大豆、花生、小麦、腰果过敏原DNA序列的多个特异性探针分别为SEQ ID NO：3、6、9、12；鸡蛋、牛奶、鱼和虾，所使用的分别对应于鸡蛋、牛奶、鱼和虾过敏原DNA序列的多个特异性探针分别为SEQ ID NO：15、18、21、24；或者大豆、花生、小麦、腰果、鸡蛋、牛奶、鱼和虾，分别对应于该8种过敏原DNA序列的8种特异性探针为：SEQ ID NO：3、6、9、12、15、18、21、24。