[发明专利]一株具有较强抑菌作用的枯草芽孢杆菌及其应用

权利要求书

1.一株具有较强抑菌作用的枯草芽孢杆菌，其特征在于：该菌株命名为Bacillus subtilisB7348，已于2010年10月12日保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCCM 2010260。

2.根据权利要求1所述的具有较强抑菌作用的枯草芽孢杆菌，其特征在于：所述枯草芽孢杆菌的菌种生物学特性如下：该菌种的细胞大小为通常为(0.7μm～0.8μm)×(2.0μm～3.0μm)，杆状，很少成链，染色均匀，无荚膜，鞭毛侧生，能运动；芽孢呈椭圆形或柱状，中生或偏生，大小为0.8μm×(1.5μm～1.8μm)；游离孢子表面着色弱；培养基上的菌落圆或者不规则形，表面色暗，变厚和不透明，可起皱，可呈奶油色或褐色；革兰氏阳性，接触酶阳性，能发生V-P反应；能利用葡萄糖、阿拉伯糖、木糖和甘露醇产酸，能水解淀粉，分解色氨酸形成吲哚；生长温度最高值45～55℃，最低值5～20℃，最适温度为37℃。

3.权利要求1所述的具有较强抑菌作用的枯草芽孢杆菌作为饲料添加剂的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：应用时，以菌粉的形式添加到饲料中，所述菌粉是通过以下步骤得到的：

(i)菌种：选用枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis B7348，CCTCC M 2010260；

(ii)斜面培养：将冻干粉菌种接种于固体斜面培养基上，在32～40℃培养20～28h；

(iii)一级种子培养：取培养好的斜面，在无菌条件下接种于50mL～100mL种子液体培养基中，在32～40℃条件下，静置培养14～18h，制得一级种子液；

(iv)扩大培养：以5％的接种量，将一级种子液接于500mL～1000mL种子液体培养基中，在32～40℃条件下，静置培养10～16h，制得二级种子液；

(v)发酵罐培养：以5％的接种量，将二级种子液接于液体发酵培养基中，于32～40℃条件下，静置培养16～24h；

(vi)收集发酵产物：待步骤(v)之发酵液黏度达12000～15000cP时，收集发酵液；

(vii)发酵结束后，立即将发酵液离心并用清水清洗，如此反复2～3遍后冷冻干燥，粉碎，即为菌粉成品；或：发酵结束后，立即喷雾干燥，即得菌粉成品；

上述步骤(iii)、(iv)中所述种子液体培养基配方为：葡萄糖20g/L、蛋白胨10g/L，酵母膏5g/L，使用时，调节pH至6.5～7.5，115℃条件下灭菌20min；步骤(ii)中所述固体斜面培养基为上述种子液体培养基中添加1.5～2.0％的琼脂粉；步骤(v)中所述液体发酵培养基配方为：葡萄糖20g/L、蛋白胨10g/L、酵母膏5g/L、氯化钠5g/L，使用时，调节pH至6.5～7.5。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：应用时，添加植物乳杆菌LP-11，组成产品：肽菌素，作为饲料添加剂加入到饲料中。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述肽菌素中，枯草芽孢杆菌B7348菌粉的活菌数为2.0×10⁸cfu/g，植物乳杆菌LP-11菌粉的活菌数为1.0×10⁸cfu/g。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述肽菌素作为饲料添加剂的用量如下：

对正常不患病的种禽，用量为饲料总质量的0.2％；

对患病的种禽，用量为饲料总质量的0.4％；

对妊娠母猪，用量为饲料总质量的0.1～0.2％；

对哺乳母猪，用量为饲料总质量的0.3～0.4％；

对患有乳房炎的奶牛，用量为80～120g/头/天；

对患有阴性乳房炎的奶牛，用量为40g/头/天。